I trombociti
I trombociti, noti anche come piastrine, sono una parte importante della coagulazione del sangue. Sono cellule anucleate, piatte, irregolarmente rotonde, ovali o oblunghe. Hanno un citoplasma azzurro, che può contenere granuli fini e azzurofili.1 I cosiddetti “pseudopodi” possono essere visibili nelle piastrine attivate.
Le piastrine si formano nel midollo osseo.
I megacariociti si differenziano dai progenitori megacariocitici-eritrocitici bipotenti. La desquamazione produce macropiastrine e trombociti.2
Il tempo medio di sopravvivenza delle piastrine nel sangue periferico è di 3 – 9 giorni (a seconda della letteratura1). I cavalli hanno una concentrazione piastrinica più bassa rispetto ad altri mammiferi.1 In uno striscio di sangue, 6 – 10 piastrine per campo visivo (ingrandimento 1000x con olio ad immersione) sono sufficienti per un’adeguata conta piastrinica. A seconda della letteratura, l’intervallo di riferimento varia tra 90 – 350 G/l (Laboklin 90 – 300 G/l).1
Preanalitica
La preanalitica gioca un ruolo importante nel determinare la validità dei risultati diagnostici di laboratorio. Questa affermazione si applica a tutti i parametri ematologici, non solo alle piastrine. Uno scorretta tecnica di prelievo del sangue, un tempo di attesa eccessivo o una errata sequenza di riempimento delle provette, possono causare l’attivazione delle piastrine. Questo spesso porta a piccoli o grandi coaguli che possono falsificare le analisi o addirittura renderle non possibili. Nella migliore delle ipotesi, un campione di sangue deve venire prelevato in condizioni di assenza di stress e non dopo uno sforzo (allenamento). Dovrebbe essere evitato poi un tempo di attesa eccessivo. L’ordine ideale di riempimento delle provette: si riempie prima la provetta del siero e per ultima la provetta EDTA. Se viene prelevato solo sangue EDTA, le prime gocce di sangue devono essere eliminate. La concentrazione piastrinica nel cavallo è relativamente indipendente dalla conservazione fino a 24 ore dopo la raccolta del sangue.3
La concentrazione piastrinica deve essere determinata dal sangue intero non coagulato. In un confronto tra gli anticoagulanti (acido K3-etildiamminotetraacetico (EDTA), litio eparina (eparina) e citrato di sodio (citrato)), è possibile rilevare cambiamenti significativi nei parametri piastrinici nel sangue con eparina.3
Quando è stata utilizzata l’eparina come anticoagulante, si è verificato un aumento di aggregati di trombociti e quindi la concentrazioni di trombociti è stata misurata come erroneamente diminuita.4 L’EDTA come anticoagulante è più adatto per l’analisi del sangue.4 In singoli casi, tuttavia, è stata descritta anche una pseudotrombocitopenia indotta da EDTA nei cavalli, che porta a una maggiore formazione di aggregati di trombociti.7 È possibile ottenere una riduzione degli aggregati mediante una misurazione rapida entro 2 ore dalla raccolta del sangue e riscaldamento del campione a 37°C prima della misurazione.8 L’anticoagulante di scelta per determinare la concentrazione piastrinica è l’EDTA. Il sangue deve essere analizzato entro 24 ore e conservato il più fresco possibile.
Un suggerimento: metti i campioni di sangue in una scatola di polistirolo nella tua auto pratica per proteggerli dal calore e dal gelo!
Diagnostica di laboratorio
La concentrazione piastrinica è solitamente inclusa in ogni emocromo completo ma puoi richiederla anche singolarmente. Inoltre, dovresti sempre fare/inviare anche uno striscio di sangue. Questo striscio di sangue può essere utilizzato per cercare aggregati o per confermare la trombocitopenia quando la conta piastrinica è bassa. Per la valutazione, lo striscio di sangue viene asciugato all’aria e quindi colorato. Ad esempio, puoi usare Wright-Giemsa o Diff-Quick per colorare (Figura 2a e 2b).
Per un’ulteriore valutazione sono sempre necessari un’anamnesi dettagliata (es. contatto con agenti infettivi virali, batterici, parassiti? febbre? sintomi gastrointestinali? sintomi respiratori?) e un esame approfondito del paziente.
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Macropiastrine, ingrandimento 1000x, olio ad immersione, colorazione Giemsa
Immagine: Laboklin
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Fig. 2a Eritrociti e trombociti (freccia nera), colorazione di Giemsa, ingrandimento 1000x, olio per immersione
Immagine: Laboklin
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Fig. 2b Eritrociti e trombociti (freccia nera), colorazione Diff-Quick, ingrandimento 1000x, olio per immersione
Immagine: Laboklin
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Fig. 3 Grandi aggregati piastrinici nello striscio di sangue. Non è possibile determinare la conta piastrinica negli aggregati. Ingrandimento 100x, Diff-Quick
Immagine: Laboklin
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- Tabella 1: Riassunto delle cause di trombocitopenia 10,11
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- Tabella 2: Riassunto delle cause di trombocitosi 11,22,23
La valutazione microscopica dei trombociti viene inizialmente eseguita utilizzando un ingrandimento 100x (obiettivo 10x). Lo striscio viene controllato per gli aggregati piastrinici. Vengono quindi contati i trombociti nel monostrato con un ingrandimento di 1000x (obiettivo 100x). Per ottenere la conta piastrinica approssimativa, moltiplichiamo per 15-20 la media di 10 campi visivi. Devono essere presi in considerazione anche eventuali aggregati.
Un esempio: nel monostrato, vengono contate 98 piastrine da 10 campi visivi. La media è di 9,8 piastrine per campo visivo. Il numero viene arrotondato per eccesso a 10 e quindi moltiplicato per 15.
Quindi il cavallo ha una conta piastrinica stimata di 150 G/l. Eventuali aggregati devono essere stimati approssimativamente in aggiunta a questo numero. Se viene confermata una trombocitopenia nello striscio di sangue, a seconda dell’anamnesi e della diagnosi sospetta, si raccomandano ulteriori indagini, ad esempio:
- indagini PCR: ad esempio per Babesia, Anaplasma
- test di coagulazione: PT, aPTT, tempo di trombina, fibrinogeno
- test sierologici: ad esempio anemia infettiva equina (EIA), virus dell’herpes equino (EHV)
- ematologia: anticorpi antipiastrinici
- eventualmente biopsia e citologia del midollo osseo.
Trombocitopenia
Nella maggior parte dei casi, la trombocitopenia nei cavalli è un reperto accidentale. La trombocitopenia consiste in una riduzione della conta piastrinica al di sotto della norma specie-specifica.9
La trombocitopenia di solito indica un processo patologico, che può portare a disturbi della coagulazione se la concentrazione di trombociti è gravemente ridotta.10 Spesso c’è più di una ragione per la trombocitopenia.12
Si può fare una distinzione tra pseudotrombocitopenia e trombocitopenia vera.
La pseudotrombocitopenia si verifica quando la conta piastrinica non riesce a contare tutte le piastrine presenti. Pertanto, come primo passo è sempre raccomandata una valutazione microscopica manuale della trombocitopenia.10
Le ragioni delle vere trombocitopenie sono la ridotta formazione nel midollo osseo, l’aumento del consumo, la distruzione delle piastrine o l’aumento del sequestro (Tab. 1).10, 11
Segni clinici di trombocitopenia
Nella maggior parte dei cavalli, la trombocitopenia è secondaria a varie malattie sottostanti.12
Il quadro clinico corrisponde solitamente alla malattia scatenante. In generale, i sintomi sono rari nella trombocitopenia da lieve a moderata (90-30 G/L) a meno che l’emostasi secondaria non sia compromessa. Trombocitopenie di alto grado (< 30 G/L) portano a un’emostasi primaria alterata.13, 14 I pazienti presentano petecchie ed ecchimosi che si osservano principalmente sulle mucose e sulla sclera. È stato anche descritto un aumento del sanguinamento dal naso.
Si assiste ad un prolungato sanguinamento dopo il prelievo di sangue.13, 14
Trombocitosi
La trombocitosi consiste in un aumento del numero di trombociti circolanti nel sangue periferico, al di sopra dell’intervallo di riferimento specie-specifico. Come per la trombocitopenia, si può fare una distinzione tra pseudotrombocitosi e vera trombocitosi (Tab. 2). La pseudotrombocitosi si verifica quando nella conta piastrinica si contatno cellule diverse dalle piastrine.
Queste possono includere piccoli eritrociti o eritrociti lisati. In questi casi sono di aiuto la valutazione del grafico di dispersione (scatterplot) e dello striscio di sangue.
Trombocitosi fisiologiche di basso grado si verificano spesso durante e dopo l’allenamento o quando è presente eccitazione (ad es. stress durante il prelievo di un campione di sangue). Ciò è causato dalla contrazione della milza che rilascia in circolo le piastrine immagazzinate.18, 19
La vera trombocitosi può essere suddivisa in trombocitosi primaria e secondaria. Nella trombocitosi secondaria, la concentrazione piastrinica è solitamente solo da lievemente a moderatamente elevata (300-500 G/l), mentre è marcatamente elevata nella trombocitosi primaria. Inoltre, la trombocitosi primaria è più frequentemente associata a sanguinamento clinico e trombosi.20, 21, 22
La trombocitosi secondaria si verifica principalmente nel contesto dell’infiammazione e dell’infezione.24
Conclusione
La conta piastrinica è inclusa in quasi tutti gli emocromi e può fornire informazioni sulle malattie sottostanti. In ogni caso, deve essere prima controllata manualmente e al microscopio per verificarne la plausibilità.
La causa della trombocitopenia o della trombocitosi deve quindi essere analizzata sulla base di una buona anamnesi e di un esame clinico.
Dott.ssa med. vet. Annemarie E. Baur-Kaufhold
