{"id":1439770,"date":"2020-10-13T09:28:32","date_gmt":"2020-10-13T07:28:32","guid":{"rendered":"https:\/\/staging-wp-int.laboklin.com\/?p=1439770"},"modified":"2024-09-06T09:20:07","modified_gmt":"2024-09-06T07:20:07","slug":"i-test-batteriologici-micologici-per-lippiatra-come-utilizzarli-al-meglio-parte-1","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/laboklin.com\/it\/i-test-batteriologici-micologici-per-lippiatra-come-utilizzarli-al-meglio-parte-1\/","title":{"rendered":"I test batteriologici \/ micologici per l\u2019ippiatra: come utilizzarli al meglio (parte 1)"},"content":{"rendered":"

[vc_row][vc_column][vc_column_text]I test batteriologici e micologici sono un ausilio molto importante nella clinica equina di campo. Vediamo alcuni suggerimenti che permettono di ottimizzare l\u2019efficienza di questo tipo di diagnostica per i vari distretti.<\/p>\n

Considerazioni preanalitiche<\/h2>\n

La cosa migliore da fare quando si richiede un esame batteriologico che riguardi un tessuto, un organo o delle secrezioni, sarebbe di inviare al laboratorio il materiale in toto da seminare. Purtroppo questo non sempre \u00e8 possibile per ovvie problematiche logistiche (corriere, attivit\u00e0 itinerante del veterinario che si occupa di equini, materiali deperibili, \u2026) e quindi una buona opzione \u00e8 quella di utilizzare un tampone con terreno di trasporto, in modo da \u201cfotografare\u201d la situazione batteriologica\/micologica del campione al momento del prelievo.<\/p>\n

Laboklin fornisce gratuitamente dei tamponi con medium di Amies con carbone, che permette un buon isolamento di molti funghi e batteri aerobi ed anaerobi, responsabili di patologia in veterinaria e anche particolarmente delicati (es. Taylorella equigenitalis <\/em>per le fattrici). Non si tratta di un terreno nutritivo ma solamente preservante, che inibisce le reazioni cellulari degenerative ed ossidative, fotografando per quanto possibile la popolazione dei microrganismi presente al momento del prelievo per almeno 24\/48 ore, sia per batteri che per miceti. A richiesta forniamo anche tamponi con terreno Stuart senza carbone, anch\u2019esso adatto alla maggior parte degli apparati. I tamponi senza terreno di trasporto sono invece utili per l\u2019esecuzione di esami genetici o di PCR per la ricerca di diversi agenti patogeni.<\/p>\n

Una volta prelevato il materiale da sottoporre a coltura, si consiglia di spedirlo entro le 24 ore. Non \u00e8 necessario mantenerlo refrigerato, quando arriver\u00e0 in laboratorio verr\u00e0 infatti immesso in un primo terreno di arricchimento in modo da poter avere una prima crescita nelle successive 24\/48 ore ed un secondo isolamento entro i 3 giorni.<\/p>\n

Laboklin fornisce a richiesta anche delle apposite bottiglie per emocoltura che non necessitano di trasporto particolare, utilizzabili anche per l\u2019esame batteriologico di alcuni liquidi cavitari particolarmente delicati.<\/p>\n

Per la coltura micotica valgono le stesse indicazioni della batteriologia. Inoltre, dato che la crescita fungina \u00e8 generalmente pi\u00f9 lenta, per alcuni microrganismi possiamo effettuare una ricerca tramite metodica PCR che permette di identificare l\u2019agente eziologico in 2\/4 giorni anzich\u00e9 aspettare lo sviluppo della colonia. Si possono utilizzare tamponi con medium, sperma per la Taylorella equigenitalis <\/em>o parti di cute, croste e peli per i dermatofiti.<\/p>\n

Antibiogramma\u00a0<\/strong><\/h2>\n

Si tratta di un metodica sviluppata per stabilire se il microrganismo isolato in coltura \u00e8 sensibile agli antibiotici (o antimicotici) che possono venir utilizzati nel cavallo. Esistono due metodiche utilizzabili a questo scopo, vediamo quali sono.<\/p>\n

Metodo per diffusione (Kirby \u2013 Bauer): <\/em>si applicano sulla superficie della coltura isolata dei dischetti di carta impregnati con una quantit\u00e0 fissa dei vari antibiotici che intendo testare, i quali diffonderanno concentricamente nell\u2019agar della piastra di coltura, causando un alone di inibizione della crescita. Misurando dopo 24 ore questa zona di inibizione della crescita attorno ad ogni dischetto di antibiotico, sar\u00e0 possibile catalogare il microrganismo come sensibile (S), resistente (R) o intermedio (I) per ogni antibiotico presente sul disco, in funzione proprio dell\u2019ampiezza della zona di inibizione (maggiore \u00e8 l\u2019ampiezza, pi\u00f9 \u00e8 efficace la molecola). I diametri rappresentano l\u2019espressione dell\u2019inibizione della crescita rapportata alla diffusione di una quantit\u00e0 fissa di antibiotico nel gel e non permettono di quantizzare la minima concentrazione efficace (MIC) di antibiotico che potrebbe essere sufficiente ad ottenere l\u2019effetto terapeutico desiderato.<\/p>\n

Microdiluizione in brodo: <\/em>si tratta del metodo che utilizziamo di routine e che costituisce il gold standard per la valutazione dell\u2019efficacia di un antibiotico, in quanto fornisce risultati quantitativi. La coltura isolata viene infatti inoculata in pozzetti contenenti diluizioni seriali degli antibiotici da testare (16\u20138\u20134 -2\u20131-0,5\u20130,25-0,12 mg\/L), incubata a 37\u00b0 per 20 ore, dopodich\u00e9 viene letta la pi\u00f9 bassa concentrazione di antibiotico (MIC) che risulta inibire in modo visivamente chiaro la crescita delle colonie presenti nel brodo e questo costituisce il cosiddetto \u201cendpoint\u201d<\/em>.<\/p>\n

I valori soglia per stabilire la sensibilit\u00e0 o resistenza del microrganismo presente in coltura sono di solito quantizzati con un numero variabile, specifico per ogni coppia \u201cmicrorganismo vs antibiotico testato\u201d e vengono stabiliti da Comitati Internazionali, considerando la possibilit\u00e0 di ottenere facilmente quel livello terapeutico plasmatico di farmaco in vivo, senza incorrere in fenomeni di tossicit\u00e0; lo stesso valore numerico potrebbe quindi essere abbinato ad una definizione di \u201cresistente\u201d per una molecola poco diffusibile nei tessuti, oppure \u201csensibile\u201d per un\u2019altra, qualora le corrispondenti concentrazioni plasmatiche fossero ottenibili con facilit\u00e0 nel cavallo.<\/p>\n

In pratica vengono stabiliti due valori soglia (i cosiddetti \u201cbreakpoints\u201d <\/em>bkp1 e bkp2) all\u2019interno dei quali si \u00e8 stabilito, attraverso prove cliniche (microbiologiche e farmacologiche), il range ottimale di efficacia di quella molecola per il cavallo, e si confronta il cosiddetto \u201cendpoint\u201d <\/em>della molecola testata in vitro con questi due valori di riferimento: a seconda di dove si posiziona l\u2019endpoint <\/em>relativo alla MIC del dato antibiotico, il microrganismo viene classificato come:<\/p>\n

    \n
  • sensibile<\/u> se inferiore a bkp1<\/li>\n
  • intermedio<\/u> se all\u2019interno di bkp1 e bkp2<\/li>\n
  • resistente<\/u> se superiore a bkp2<\/li>\n<\/ul>\n

    Il clinico poi con queste informazioni pu\u00f2 valutare quale antibiotico utilizzare e con quale dosaggio per avere la maggior probabilit\u00e0 di successo terapeutico, riducendo l\u2019insorgenza di fenomeni di antibioticoresistenza.<\/p>\n

    Vediamo ora i principali impieghi della batteriologia \/ micologia per singolo apparato nel cavallo.<\/p>\n

    Apparato urogenitale<\/h2>\n

    Tamponi uterini: <\/em>abbiamo a disposizione dei pacchetti particolarmente convenienti di \u201cIdoneit\u00e0 alla riproduzione\u201d<\/u> (esame batteriologico, CEM e micologico) appositamente studiati per investigare l\u2019endometrio; possono essere richiesti su tamponi diretti, su tampone da biopsia o da low volume flush. La crescita batterica riscontrata sar\u00e0 sottoposta ad antibiogramma qualora ritenuta patogena per quel distretto o presente in alta carica. Nel referto verr\u00e0 specificato se la fattrice pu\u00f2 venire coperta o necessita di un trattamento.<\/p>\n

    Per una maggior accuratezza \u00e8 sempre consigliabile abbinare alla batteriologia i reperti clinici, l\u2019anamnesi ed un esame citologico (da citobrush o low volume flush) per poter prendere le corrette decisioni terapeutiche.<\/p>\n

    Tamponi per CEM (Taylorella equigenitalis): <\/em>si tratta di un agente patogeno venereo piuttosto contagioso. Questi tipo di accertamenti vengono solitamente effettuati in sede di compravendita o prima di una monta naturale, sia nella fattrice che nello stallone.<\/p>\n

    Possiamo allestire sia una coltura contestualmente ad un normale esame batteriologico, sia solo per Taylorella<\/em>, o ancora effettuare una PCR su tampone con medium, quest\u2019ultima metodica con tempistiche particolarmente favorevoli. A questo proposito ricordo che offriamo un \u201cProfilo CEM – PCR per lo stallone<\/u> (3 localizzazioni: prepuzio, uretra e fossa del glande) e per la fattrice<\/u> (2 localizzazioni: fossa e seni clitoridei)\u201d che permettono di avere un esito in 1\u2013 3 giorni.<\/p>\n

    Una crescita batterica in bassa carica senza ulteriori indizi (citologici, clinici od ecografici) di infezione in atto, non permette una diagnosi di endometrite.<\/p>\n

    Possibili patogeni endometriali includono: Streptococcus zooepidemicus, Klebsiella sp., Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter. <\/em>La presenza di miceti come Candida sp. \/ Aspergillus sp<\/em>. \u00e8 sempre un indizio di alterazioni anatomo-funzionali gravi dell\u2019apparato riproduttore.<\/p>\n

    Per la terapia sono utilizzabili sia antibiotici \/ antimicotici per infusione uterina che per via sistemica e la scelta si effettua tenendo conto dei risultati dell\u2019antibiogramma, della fase del ciclo estrale e delle tempistiche di inseminazione.<\/p>\n

    Urina: <\/em>\u00e8 sempre preferibile recuperare il materiale tramite cateterismo, sia nella fattrice che nello stallone, anche se \u00e8 descritta la presa delle urine \u201cal volo\u201d, che pu\u00f2 essere per\u00f2 difficoltosa in alcuni soggetti. La cistocentesi \u00e8 metodica attuabile solamente nel puledro neonato o molto piccolo, per ovvi limiti dimensionali.
    \nLe urine possono anche essere sottoposte a coltura direttamente, se prelevate e spedite rapidamente e quindi seminate entro le 24 ore dalla raccolta. In alternativa \u00e8 preferibile effettuare subito un tampone con medium sul materiale raccolto per poi inviarlo contestualmente al resto del liquido prelevato per ulteriori approfondimenti. Laboklin fornisce gratuitamente i contenitori adatti per la raccolta di urina, con tutte le accortezze e protezioni necessarie per una spedizione in sicurezza.<\/p>\n

    Specificando sempre un\u2019accurata anamnesi, la sintomatologia clinica e la metodica di raccolta del campione, i nostri batteriologi potranno valutare se una eventuale crescita batterica \u2013 dato che le urine non sono sterili – sia da considerarsi patologica o meno, e quindi allestiranno un antibiogramma se il tipo di microrganismo o la carica riscontrata faranno pensare ad una infezione in corso, in modo da aiutare il clinico nel prendere le decisioni terapeutiche pi\u00f9 opportune.<\/p>\n

    Possibili patogeni isolabili includono:
    \nStreptococcus zooepidemicus, Klebsiella sp., Escherichia coli, Corynebacterium sp.. Pe<\/em>r la terapia (dopo antibiogramma) sono da preferire gli antibiotici che vengono escreti per via urinaria.<\/p>\n

    Apparato respiratorio<\/h2>\n

    Vie respiratorie superiori: <\/em>i tamponi da scolo nasale sono generalmente poco specifici per la diagnostica batteriologica delle forme respiratorie di questo distretto. Per le patologie dei seni, delle tasche gutturali e della faringe si consiglia il prelievo tramite endoscopio. \u00c8 possibile anche effettuare un tampone dell\u2019ostio delle tasche od un tampone faringeo \u201calla cieca\u201d utilizzando i normali tamponi uterini, ovviamente scamiciati. La metodica non \u00e8 complicata e non richiede sedazione, permette di ottenere campioni particolarmente diagnostici con meno contaminanti. Ovviamente vanno posti in apposito medium per il trasporto al laboratorio.<\/p>\n

    Tracheal wash e BAL: <\/em>il fluido raccolto con queste metodiche pu\u00f2 essere inviato al laboratorio in provetta da siero per la batteriologia e in provetta EDTA per la citologia, oppure possiamo effettuare un tampone con medium direttamente al momento del prelievo, ricordando di eliminare il fluido che appare molto schiumoso per la presenza di surfattante.<\/p>\n

    L\u2019esame batteriologico da TW permette di evitare la contaminazione batterica di microrganismi presenti in orofaringe (a meno di ripetuti accessi di tosse), mentre la batteriologia da BAL \u00e8 generalmente meno attendibile poich\u00e9 \u00e8 possibile che si verifichino delle contaminazioni al momento della introduzione del catetere \/ endoscopio per via naso-faringea.<\/p>\n

    Le vie aeree del cavallo non sono sterili ed alcuni batteri potenzialmente patogeni potrebbero essere isolati anche in animali sani. La discriminante terapeutica quindi \u00e8 sia la quantizzazione delle colonie ma soprattutto la citologia ed i reperti clinici.<\/p>\n

    Possibili patogeni respiratori includono: Streptococcus zooepidemicus, Actinobacillus, Klebsiella sp., Escherichia coli, Rhodococcus <\/em>nel puledro.<\/p>\n

    Per la terapia (dopo opportuno antibiogramma) sono da preferire gli antibiotici che diffondono bene nel parenchima polmonare e negli eventuali ascessi presenti.<\/p>\n

    Liquido pleuro-pericardico: <\/em>questi fluidi devono essere raccolti con metodica ecoguidata. \u00c8 possibile poi:<\/p>\n