Endoparassiti

Prendiamo in esame le più comuni infestazioni da endoparassiti che possono causare patologie intestinali nei puledri e nei giovani cavalli.

 

Nematodi

Ascaridi (Parascaris equorum è la principale specie coinvolta): questi parassiti vengono assunti dal puledro dal terreno attraverso l’ingestione di uova infettanti (contenenti L2) eliminate da adulti parassitati. Le larve ingerite schiudono nello stomaco e passano al fegato e al polmone attraverso il circolo linfatico, penetrando la mucosa gastrica. Vengono poi ingerite tramite le secrezioni tracheali e si localizzano nel piccolo intestino dove diventano sessualmente mature. Possono occasionalmente localizzarsi a livello gastrico in caso di infestioni massive. Da qui iniziano a liberare uova che verranno eliminate con le feci. Il ciclo completo dura circa 10 / 16 settimane, i parassiti adulti sono biancastri e si possono facilmente rilevare nelle feci di soggetti infestati, in quanto non si fissano alla parete intestinale, ma vivono frammisti alle ingesta.

La loro azione patogena principale è di tipo ostruttivo, formando dei grovigli che possono facilmente ostruire il lume intestinale dei puledri, specialmente nel primo anno di vita, con un picco di massima incidenza tra i 4 e gli 8 mesi di età, causando coliche anche fatali e peritoniti.

Dopo i due anni di vita i cavalli adulti sono meno predisposti in quanto il lume intestinale è maggiore e gli animali sviluppano nel tempo una sorta di resistenza immunitaria.

La diagnosi si effettua tramite flottazione su materiale fecale, con rilevazione delle uova.

 

Piccoli strongili (Strongiloides westerii): sono piccoli nematodi che mostrano un ciclo particolare con fasi a vita libera nel terreno e fasi all’interno del tratto intestinale. La penetrazione nell’ospite si verifica sia per via percutanea che orale. Quando le L3 arrivano nel circolo sanguigno raggiungono i polmoni, vengono deglutite attraverso la trachea e tornano nell’intestino dove si svilupperanno per partenogenesi in una forma adulta. Le larve, in condizioni particolari (mesi freddi), possono rimanere incistate nella mucosa intestinale in stato di ipobiosi. In questa forma possono localizzarsi anche a livello mammario e trasmettersi al puledro tramite il latte materno.

La diagnosi si effettua per flottazione e si consiglia di trattare le fattrici in prossimità del parto, per evitare infestioni precoci nel neonato.

 

Grossi strongili (Strongylus vulgaris, Strongylus edentatus): le uova si localizzano nel terreno e vengono ingerite come L3 dal pascolo, penetrano la mucosa e passano nel torrente circolatorio (S. vulgaris) o a livello epato-peritoneale (S. edentatus) come L4, localizzandosi o nei vasi dove possono provocare danni vascolari (trombosi ed aneurismi verminosi) o incistarsi a livello intramurale di cieco e colon (come L5).

Ritornano poi nel lume intestinale in forma adulta. Questi cicli sono molto lunghi quindi sono raramente colpiti i puledri di meno di 18 / 24 mesi di vita.

Anche per questi parassiti la diagnosi si effettua tramite flottazione e la differenziazione tra piccoli e grossi strongili avviene con la coltura fecale (1).

 

Protozoi

I principali protozoi che possono colpire i puledri neonati sono Cryptosporidium sp., che nei puledri immunocompromessi può causare diarrea acquosa, di solito autolimitante, e (meno frequentemente) Eimeria sp. e Giardia sp., spesso come agenti coinfettivi.

Gli equini si infestano per via orofecale, assumendo dall’ambiente le oocisti sporulate, che si attivano nello stomaco penetrando poi nelle cellule villose dell’ileo. I soggetti adulti (e le fattrici al parto) possono eliminare delle piccole quantità di oocisti pur in maniera asintomatica, visto che nel tempo acquisiscono una sorta di resistenza immunitaria che manca invece nei puledri nella fascia di età 0 – 4 settimane.

Nei puledri colpiti l’infestazione può provocare diarrea acquosa profusa, innescata sia dalla compromissione dei villi, che dall’azione osmotica delle tossine parassitarie. Questo sintomo è di solito autolimitante nell’arco di qualche giorno, se non sono presenti altri cofattori batterici, virali o parassitari congiunti. Durante gli episodi diarroici i puledri parassitati eliminano elevate quantità di oocisti infettanti nell’ambiente circostante, con un effetto di amplificazione epidemiologica importante.

Il parassita Giardia sp. può colpire anche l’uomo in casi particolari, mentre Cryprosporidium sp. ed Eimeria sp. possono parassitare anche i ruminanti.

La terapia per questi parassiti implica l’utilizzo di molecole ad azione mirata, quindi la diagnostica fecale in questi casi appare indispensabile per instaurare una corretta terapia.

 

Cestodi

Anoplocephala perfoliata è il principale verme piatto che parassita il cavallo, è dotato di uno scolice con cui si fissa alla mucosa intestinale (specialmente di digiuno e ileo), e può raggiungere la lunghezza di 5 cm. Il ciclo di questo parassita è piuttosto lungo e raramente ritroviamo dei soggetti colpiti di meno di 2 anni di età. I principali effetti riscontrati sono malassorbimento, dimagrimento e coliche da alterazione della peristalsi dell’ultimo tratto intestinale.

La diagnosi copromicroscopica di questa parassitosi non è semplice, in quanto l’escrezione delle proglottidi con le uova tramite le feci è intermittente, e la mole di materiale fecale prodotta dagli equini è importante.

E’ disponibile un test sierologico per la rilevazione di anticorpi contro Anoplocephala perfoliata, anche se la sua utilità diagnostica appare limitata dato che la negativizzazione dei soggetti trattati richiede tempi lunghi (1). Di solito si trattano i soggetti sulla base dei rilievi clinici e con un’anamnesi di esclusivi trattamenti antielmintici non mirati, dato che questi parassiti sono sensibili ad un’unica molecola specifica (Praziquantel) o a una doppia dose di Pyrantel pamoato.

 

Lawsonia intracellularis

Questo batterio gram-negativo intracellulare obbligato colpisce i puledri intorno a 4 / 6 mesi di vita, causando un’enterite proliferativa cronica con diarrea persistente, possono essere colpiti occasionalmente anche gli adulti.

Il periodo maggiormente a rischio appare essere l’autunno / l’inverno.

Altri sintomi aspecifici possono comprendere letargia, febbre, anoressia, perdita di peso, pelo opaco, malassorbimento con ipoalbuminemia, edemi, e lieve rialzo della seria bianca. E’ descritta una forma subclinica, generalmente autolimitante, caratterizzata da calo di incremento ponderale e ritardo di crescita, senza grossi rilievi di laboratorio.

L’ecografia addominale potrebbe rilevare un inspessimento della mucosa del piccolo intestino (oltre i 5 mm) a causa dell’edema sottosieroso causato dall’agente eziologico. Un eventuale puntato addominale può mostrare la presenza di un trasudato non infiammatorio (2).

La diagnosi tramite PCR fecale è attendibile, possono verificarsi esiti negativi in caso di trattamento antibiotico precoce.
E’ possibile la rilevazione della Lawsonia con opportune colorazioni istologiche della mucosa intestinale, la quale mostra alterazioni istologiche caratteristiche (2).

I soggetti sintomatici vanno isolati e sono necessari almeno 7 gg di terapia antibiotica per ridurre la diffusione del batterio nell’ambiente tramite le feci.
Possono essere necessarie cure supportive mirate in caso di grave ipoalbuminemia e disidratazione.

 

Laboklin offre i seguenti profili fecali:

• Profilo feci puledro completo di ricerca parassitologica (tramite flottazione e S.A.F.C.) oltre alla batteriologia fecale e alla PCR per virus e batteri
• Profilo parassiti con esame copromicroscopico quali-/quantitativo (flottazione, S.A.F.C. e McMaster)
• Profilo diarrea puledro PCR che testa il materiale fecale per vari virus, batteri e Lawsonia intracellularis

 

Sono disponibili presso Laboklin anche:

• coltura larvale fecale per la differenziazione di genere dei nematodi
• PCR solo per Lawsonia intracellularis
• ricerca su siero di anticorpi per Anoplocephala perfoliata

I camelidi sudamericani si sono adattati alla vita ad alta quota, in ampi spazi ed esposti a un clima piuttosto secco e freddo, per questo i loro globuli rossi hanno caratteristiche peculiari (sono piccoli e di forma ellittica) come adattamento alla scarsità di ossigeno, e l’intestino a spirale ha sviluppato una notevole capacità di riassorbire l’acqua.

La digestione della fibra è, rispetto agli altri ruminanti domestici, più lenta e più efficiente proprio perché le ingesta rimangono più tempo nei prestomaci (C. Whitehead).

La peculiare conformazione anatomica di labbra e cavità orale li rende poco propensi ad assumere fieni a stelo lungo, che peraltro possono causare facilmente problemi dentali come ascessi e lesioni gengivali (Linden&Anderson). In natura infatti questi animali hanno a disposizione ampi spazi, camminano molto e cercano fieni con buon odore, con stelo fine e morbido e con foglie succulente. Nei mesi invernali, soprattutto in assenza di pascolo, è particolarmente indicata l’aggiunta nella dieta di fieni di leguminose (erba medica) e un moderato quantitativo di concentrati per bilanciare micronutrienti e vitamine: i nostri fieni polifiti ne sono infatti spesso carenti, e una buona integrazione appare fondamentale alle nostre latitudini.

 

Vitamina D

Una delle principali problematiche associate alla vita a bassa quota, tipica dell’allevamento nei nostri climi temperati, è la carenza di vitamina D, dovuta alla minore irradiazione solare, tipica del nostro emisfero, e alla presenza di folta fibra caratteristica di questa specie. Soprattutto i soggetti a mantello scuro risentono di questa minore esposizione al sole: la forma attiva di questa vitamina (D3) è infatti sintetizzata a livello cutaneo attraverso la luce solare. La misurazione di questa forma metabolicamente più attiva nel siero risulta quindi attendibile per la valutazione dello stato di carenza.

L’integrazione (per via orale o parenterale) durante i mesi invernali è indicata specialmente nei soggetti in accrescimento, al fine di prevenire le malattie dello sviluppo (rachitismo, osteomalacia). Una carenza di questa vitamina infatti compromette l’assorbimento del calcio e del fosforo, l’integrazione è quindi indispensabile per sostenere la mineralizzazione ossea dei soggetti adulti o delle fattrici gravide, che in questo modo possono produrre un colostro ricco di vitamina D per il cria, dato che questa molecola non passa la placenta. Questo assume una particolare importanza, specialmente per i nati nei mesi freddi. E’ stata dimostrata infatti una maggiore incidenza di rachitismo nei cria nati in autunno / inverno rispetto ai soggetti nati in primavera / estate (1).

 

Diagnosi di carenza di vitamina D

E’ attendibile per la diagnosi di carenza la misurazione della vitamina D3 (colecalciferolo) su siero, che rappresenta la forma metabolicamente attiva, mentre la forma D2 (ergocalciferolo) è quella che viene comunemente integrata. Per questi animali è stata stabilita una soglia di carenza per la vitamina D3 < a 50 nmol/l, mentre non sono ancora stati validati dei limiti ematologici di riferimento per l’eccesso. Si considera un’integrazione sicura la quantità comprese tra 1.000 e 2.000 UI / kg di peso vivo ogni due mesi per os da ottobre ad aprile (C. Whitehead).

In letteratura troviamo un limite sierologico di 500 nmol/l per l’intossicazione da vitamina D, spesso associata a iperfosfatemia e ipercalcemia, oltre a iperazotemia e creatinina elevata a causa del danno renale e della mineralizzazione dei tessuti molli associata. Questi livelli si ottengono con quantità elevate di vitamina D assunte ogni giorno per un certo arco temporale.

Anche la misurazione del calcio e del fosfato può aiutare nella diagnosi di carenza, in quanto la presenza di livelli < a 0,65 mmol/l per il fosfato e < a 2,1 mmol/l per il calcio, soprattutto nei giovani, indica un grave disturbo della mineralizzazione (1).

 

Laboklin offre la misurazione del rapporto D3/D2, e anche del fosfato e del calcio su siero.

 

 

Vitamina A

Si tratta di una vitamina liposolubile che viene facilmente assunta attraverso il pascolo e i foraggi freschi, mentre nell’essiccazione delle specie erbacee per la produzione di fieni questa sostanza viene persa. Pertanto nei mesi invernali e in assenza di pascolo potrebbero verificarsi delle carenze. I cria assumono questa vitamina alla nascita tramite il colostro, in quanto anch’essa non passa tramite la placenta (R.J. Van Saun).

Eventuali carenze di breve durata vengono compensate facilmente, dato che questa vitamina viene immagazzinata nel fegato. Si ricorda che i soggetti in accrescimento hanno fabbisogni maggiori rispetto agli adulti e poche riserve.

Un soggetto con bassi livelli di vitamina A presenta una maggior incidenza di patologie cutanee (rogna) e disturbi visivi (1).

 

Laboklin testa i livelli di vitamina A nel siero (la letteratura indica come valori sierologici normali quelli compresi tra 1,70 – 4,70 micromoli/l per l’alpaca) (3).

 

 

Vitamina E (alpha-tocoferolo)

Questa vitamina svolge una potente azione antiossidante, immunomodulante, coadiuvante nella fertilità ed è indispensabile per un corretto metabolismo muscolare. La sua carenza nel neonato espone al rischio della cosiddetta “white muscle disease”. Sembrano esserci correlazioni positive tra i livelli di vitamina E nel sangue ed ematocrito, emoglobina, linfociti, ed eosinofili, probabilmente perchè la vitamina E svolge un ruolo importante nello stabilizzare la membrana cellulare delle cellule ematiche (Faye&Seboussi 2010).

La carenza si verifica specialmente nei soggetti che non hanno accesso a foraggi freschi, i cria la assumono tramite il colostro della madre.

Il deficit di vitamina E si accompagna spesso alla carenza di selenio, che porta a disturbi di funzionalità della tiroide, della funzione muscolare e cardiaca, e di conseguenza disturbi dell’accrescimento. Durante l’integrazione con prodotti contenenti entrambi i componenti, i livelli di selenio vanno monitorati attivamente, in quanto un eccesso di questo microelemento espone ad intossicazione che può essere fatale (1).

 

Laboklin offre la misurazione di vitamina E su siero con range validati.

 

La carenza di microelementi verrà trattata nel prossimo Aktuell.

 

 

Vitamina B12 (Cobalamina)

Questa vitamina appare coinvolta nello sviluppo del sistema nervoso e nell’ematopoiesi, di solito la popolazione batterica ruminale riesce a produrne una sufficiente quantità e una sua carenza è evento non comune e associato più spesso a deficienza di cobalto (essenziale per la sintesi della molecola).

Un’insufficienza di vitamina B12 provoca ritardi di crescita, perdita di appetito, debolezza, in quanto coinvolta nel metabolismo energetico.

 

Laboklin offre la misurazione della vitamina B12 su siero con range validati.

 

Dott.ssa Susanna Mereghetti

Il puledro è particolarmente esposto alle patologie enteriche, soprattutto se non ha assunto sufficienti quantità di colostro nelle prime ore di vita, o se in anamnesi abbiamo una gravidanza a rischio o un parto difficoltoso. Molti agenti (infettivi e non) possono essere responsabili di enterite o colite nel puledro nei primi giorni di vita, determinando forme diarroiche gravi, diversamente dalla “diarrea da calore di parto”. Quest’ultima rispecchia la colonizzazione batterica e il completamento del microbioma del tratto gastroenterico del neonato, è di solito autolimitante e si gestisce con semplice terapia di supporto, in quanto non causa di solito complicanze sistemiche.

In questo Aktuell prenderemo invece in esame le cause infettive (batteriche e virali) che possono causare una diarrea potenzialmente fatale nel puledro e vedremo come diagnosticarle rapidamente per poter instaurare una terapia efficace il prima possibile.

Il materiale fecale utilizzato per la diagnostica deve essere raccolto e spedito rispettando le normali regole di biosicurezza (prelievo con guanti in contenitori appositi riempiti per 2/3 e dotati di guscio protettivo) per evitare travasi accidentali durante il trasporto.

È possibile utilizzare sia la coltura batterica con semina su piastra, che la PCR. Per quest’ultima metodica possono essere sufficienti uno o due tamponi a secco di materiale fecale, dato che vengono amplificate parti di DNA dell’agente eziologico ricercato. Per il Parvovirus Laboklin effettua la PCR su siero.

Da ultimo, sempre sul materiale fecale, offriamo la ricerca di parassiti e, per alcuni di questi, i test antigenici (affronteremo questi argomenti nel prossimo Aktuell).

 

Virus enterici:

Rotavirus A, Parvovirus, Coronavirus

I virus enterici sono molto pericolosi per i puledri neonati entro i primi 4 mesi di vita, soprattutto se presente deficit di trasferimento di immunità materna, dato che l’insufficiente assunzione di colostro e di fattori protettivi mucosali (immunoglobuline, lisozima, lattoferrina, fattori di crescita…..) rende il neonato più suscettibile all’ingresso di microrganismi per via enterica. Questi microrganismi sono ubiquitari e infettano molte specie animali, incluso l’uomo.

I Rotavirus A sono degli RNA virus privi di envelop, quindi piuttosto resistenti nell’ambiente. La loro trasmissione avviene per via orofecale da soggetti infetti, ma anche da portatori asintomatici (per esempio la fattrice stessa). Una volta introdotti nel tratto gastroenterico si localizzano sui villi degli enterociti distruggendoli, questo causa diarrea acquosa e malassorbimento, principalmente per deficit di produzione di lattasi e ristagno di lattosio indigerito nel lume. La diarrea è di solito autolimitante, ma la terapia sintomatica deve essere rapida, in quanto i puledri si disidratano velocemente e, oltre alla diarrea acquosa profusa, mostrano anoressia, depressione, sintomi colici, letargia.

I soggetti colpiti diffondono il virus nell’ambiente anche fino a 8 – 10 gg dopo la guarigione e la trasmissione può avvenire per via diretta da puledro malato a sano, ma anche tramite il personale se non vengono rispettate le normali norme di biosicurezza in allevamento.

Il Parvovirus è un virus a DNA, anch’esso sprovvisto di envelope, che infetta gli enterociti causando diarrea acquosa, epatite, malassorbimento e disidratazione.

Anche il Coronavirus, un RNA virus dotato di envelope che in altre specie provoca di solito patologie respiratorie, nel cavallo causa principalmente enterite e diarrea, pertanto anche i puledri possono essere colpiti.

Sia Coronavirus che Parvovirus tendono a provocare più facilmente una diarrea di tipo autolimitante e svolgono piuttosto un importante ruolo immunodepressivo, aprendo la porta a complicanze batteriche / parassitarie secondarie o a grave compromissione metabolica con disidratazione e tossicosi.

Per tutti questi virus la sintomatologia appare sovrapponibile, pertanto la diagnosi eziologica è fondamentale per instaurare terapie precoci ed efficaci e per attuare il prima possibile le norme di biosicurezza, al fine di limitare i contagi.

 

Laboklin offre nei suoi profili la PCR per Rotavirus A e Coronavirus su feci, mentre per il Parvovirus è possibile effettuare una PCR su siero o sangue intero in EDTA.

 

 

Batteri enterici:

Salmonella, Clostridi, Rhodococcus

La Salmonella è un batterio enterico gram negativo, anaerobio facoltativo, che può contagiare i puledri tramite la via intrauterina o orofecale, durante il parto o durante i primi tentativi di accesso alla mammella, dato che alcune fattrici possono essere portatrici asintomatiche. Abbiamo già affermato che il tratto gastroenterico del neonato non possiede una microflora completa e le difese mucosali prima dell’assunzione del colostro sono parziali. Dopo aver attraversato la mucosa intestinale i batteri raggiungono il circolo linfatico e si possono localizzare nei linfonodi o in altri organi (polmone, fegato, articolazioni) con setticemia e produzione di tossine citotossiche e infiammatorie che causano diarrea e shock settico. I soggetti colpiti sono eliminatori del batterio e questa condizione può persistere (anche intermittente) dopo la guarigione.
Nelle fattrici gravide può verificarsi aborto.

La diagnosi si effettua tramite esame colturale o PCR sulle feci e la terapia deve essere precoce, aggressiva e mirata a limitare la batteriemia e la diffusione di tossine (fluidi, antibiotici, antitossici ed adsorbenti intestinali). In alcuni casi di grave compromissione del paziente possono essere indicate la somministrazione di plasma iperimmune e la nutrizione parenterale al fine di mettere a riposo la mucosa enterica e fornire adeguato supporto nutrizionale.

In caso di episodi di salmonellosi sono indispensabili delle strette procedure di biosicurezza e igiene ambientale e del parto, sia per la fattrice (pulizia del perineo e della mammella) che delle sale parto.

 

Per la fattrice che ha abortito è disponibile un test sierologico per Salmonella abortus equi.

 

I Clostridi enterici sono batteri gram positivi, anaerobi, di solito dotati di flagelli, che producono spore in ambiente sfavorevole. Molti tipi di clostridi possono causare patologie enteriche: ricordiamo Clostridium difficile, responsabile della cosiddetta colite pseudomembranosa (o colite indotta da antibiotico) nell’uomo.
Questa patologia inizia con l’alterazione della normale flora intestinale e con la colonizzazione da parte delle spore di Clostridium difficile presenti nel terreno che sopravvivono all’ambiente gastrico per poi germinare nell’ultimo tratto dell’intestino, producendo poi le tossine (enterotossina A e citotossina B) causa di danno mucosale, infiammazione, richiamo di fluidi nel lume, e quindi diarrea emorragica profusa. Le tossine provocano anche perdita di proteine, acidosi metabolica, disidratazione, intossicazione sistemica. Anche Clostridium perfringens (tipi A, B, C, D) produce differenti tipi di enterotossine, con effetti sia locali che sistemici.

 

Laboklin offre una PCR fecale sia per la rilevazione dell’agente eziologico, che delle differenti tossine prodotte (tossine A e B per Clostridium difficile, gene enterotossina, gene alfatossina e gene NetF per Clostridium perfringens).

 

L’isolamento del solo batterio non è sufficiente a fare diagnosi di clostridiosi, in quanto solo i ceppi produttori di tossine sono patogeni.

Rhodococcus hoagii è un batterio intracellulare facoltativo, gram positivo, ubiquitario, che di solito si trasmette tramite aerosol, dal pulviscolo e dalle secrezioni di altri puledri malati, localizzandosi generalmente a livello polmonare, causando sintomi respiratori ed ascessi. Può avere occasionalmente diverse localizzazioni: osteo-articolare, oculare e anche intestinale, causando enterite o ascessi addominali.
Possiamo avere l’eliminazione intestinale del microrganismo non solo nelle forme enteriche, ma anche in quelle respiratorie, poiché viene ingerito con le secrezioni bronchiali o assunto dal terreno in ambienti fortemente contaminati.

 

Per questo motivo Laboklin offre la ricerca tramite PCR su feci per questo microrganismo, con la differenziazione dei ceppi produttori della proteina VapA, fattore che indica la patogenicità del ceppo batterico eventualmente rilevato.

 

Per quanto riguarda le indicazioni di biosicurezza da applicare in caso di focolai di malattie diffusive:

Laboklin offre dei test di contaminazione / di efficacia della disinfezione delle superfici, con apposite piastre da contatto ambientali che vengono fornite su richiesta.

 

Dott.ssa Susanna Mereghetti

La risposta di fase acuta (APR) è una risposta sistemica precoce a stimoli infiammatori, infezioni e danni tissutali. Le citochine pro-infiammatorie   (IL-6, IL-1β, TNF-α) regolano la sintesi di speci-fiche proteine di fase acuta (APP) nel fegato, le   cui concentrazioni aumentano o diminuiscono nel sangue durante un’APR. Le APP sono marcatori preziosi per l’individuazione e il monitoraggio dei processi infiammatori e delle malattie neoplastiche. L’APR si attiva significativamente prima ed è più specifica delle variazioni della conta leucocitaria.

Le APP vengono classificate in base all’intensità della risposta in “major” (aumento da 10 a 100 volte), “moderate” (aumento da 2 a 10 volte) e “minor” (aumento inferiore a 2 volte).
La determinazione delle APP major è particolar-mente utile per la diagnosi precoce e il monito-raggio di alcune patologie associate a un’APR.  Nei cani, la proteina C-reattiva (PCR) è la più importante APP major, mentre nei gatti è la proteina amiloide A sierica (SAA). L’aptoglobina (Hp) e la glicoproteina acida α1 (AGP) sono tra le proteine di fase acuta (APP) che reagiscono in modo moderato o lieve. L’albumina, la transferrina e la paraossonasi sono tra le APP a reazione negativa, le cui concentrazioni tipicamente diminuiscono durante una reazione di fase acuta.  Il comportamento delle rispettive APP durante la reazione di fase acuta è illustrato nella Tabella 1.

L’infezione da Mycoplasma haemolamae nei camelidi presenta aspetti epidemiologici e clinici particolari. I micoplasmi sono batteri appartenenti al genere Mollicutes, si tratta di organismi pleomorfi, privi di parete cellulare, quindi poco resistenti all’ambiente esterno.
Alcuni micoplasmi per sopravvivere parassitano i globuli rossi, localizzandosi sulla loro superficie e per questo motivo sono stati caratterizzati come “micoplasmi emotropi” o “emoplasmi”.

Non producono generalmente tossine, ma presentano delle “adesine”: proteine di adesione alle cellule, che favoriscono la loro azione patogena, dato che tendono a danneggiare la cellula ospite su cui aderiscono – in questo caso i globuli rossi dei camelidi parassitati – provocando emolisi e anemia nei soggetti colpiti. Questo meccanismo è mediato dal sistema immunitario stesso, che può confondere gli antigeni del Mycoplasma haemolamae con quelli delle cellule del sangue dell’ospite, innescando anche una reattività di tipo immunomediato, che amplifica di fatto l’azione patogena e rende molto difficile eliminare l’agente eziologico una volta superata la malattia, come vedremo di seguito (1).

 

Infezione e segni clinici

Gli studi epidemiologici per valutare i meccanismi di trasmissione di questo agente sono ancora in corso. Dato che si tratta di un batterio emotropo si suppone che siano coinvolti la via iatrogena (trasfusioni e utilizzo di emoderivati, aghi non sterili, o anche per soluzioni di continuo della cute durante la tosa), gli insetti e gli artropodi ematofagi. La via transplacentare e la trasmissione durante il parto sono state dimostrate, anche da madri non batteriemiche ma solo positive alla PCR (3,5).

Negli animali infetti la batteriemia è transitoria e ciclica. Molti soggetti positivi non sviluppano mai la malattia e risultano carrier asintomatici, altri possono sviluppare una forma cronica subclinica di difficile diagnosi.
L’azione patogena del Mycoplasma haemolamae si manifesta causando emolisi dei globuli rossi nelle fasi batteriemiche, con conseguenti anemia emolitica, debolezza, calo di peso, disoressia e mucose pallide. La sintomatologia può essere più grave nei soggetti colpiti da parassitosi intestinali concomitanti, carenze nutrizionali, altre malattie infettive o metaboliche, stress cronici e spostamenti che contribuiscono all’indebolimento del sistema immunitario, favorendo quindi l’azione del batterio.

 

Diagnostica di laboratorio

Quali sono gli esami di laboratorio che possono aiutare il veterinario di campo per la diagnosi?

Esame emocromocitometrico: riscontro di anemia

Questo esame permette di valutare la presenza di anemia, testimoniata da un basso valore di ematocrito, globuli rossi ed emoglobina. Nessun valore particolare della conta cellulare è stato associato fino ad ora all’azione di questo agente eziologico in caso di animali che non mostrano segni clinici (4), mentre in animali sintomatici si riscontra spesso un’anemia rigenerativa normocromica normocitica, che nei camelidi indica generalmente una perdita cronica di sangue, che può peraltro verificarsi anche per parassitosi, ulcere gastriche oltre che per emolisi (Tvedten 2022). Non vi sono in letteratura descritti casi di anemia emolitica autoimmune nei camelidi, come invece si riscontra in altre specie (5).

Per alpaca e lama l’anemia viene classificata in:

• lieve: ematocrito tra 0,25 e 0,20
• moderata: ematocrito tra 0,20 e 0,15
• severa: ematocrito tra 0,15 e 0,10
• fatale: ematocrito inferiore a 0,10 (Wittek and Franz 2021).

Questi parametri sono generalmente più bassi rispetto alla classificazione delle anemie nelle altre specie, poiché la maggiore efficienza dei globuli rossi permette a questi animali di sopperire al loro calo numerico in modo più efficace. Le trasfusioni di sangue in caso di necessità sono attuabili anche in campo e le reazioni avverse a questa pratica medica sono piuttosto rare.

 

Striscio ematico

Si consiglia sempre – date le caratteristiche peculiari delle emazie di questa specie – di eseguire uno striscio ematico che verrà letto da un patologo specializzato unitamente all’esame emocromocitometrico una volta che il campione arriva in laboratorio. In questo modo è possibile diagnosticare la presenza di anomalie morfologiche che possono coadiuvare il veterinario clinico nella diagnosi: in caso di anemia rigenerativa è frequente riscontrare anisocitosi (variazione di dimensioni), poichilocitosi (variazione di forma) e presenza di dacriociti e reticolociti con policromasia (Hawkins and Hill 2014). Anche la presenza di normoblasti, ovvero globuli rossi immaturi con nucleo ancora presente, indicano anemia rigenerativa.

Lo striscio potrebbe essere utile nella diagnosi diretta della presenza di Mycoplasma haemolamae, anche se la sua assenza all’osservazione diretta su vetrino non permette di escludere la malattia.

 

PCR su sangue intero

Questo test si è dimostrato efficace nella diagnosi di infezione da Mycoplasma haemolamae, dato che rispetto allo striscio ematico su vetrino permette l’amplificazione di piccole quantità di DNA batterico rilevabili in circolo. In Europa l’incidenza di soggetti positivi oscilla tra il 15% e il 19%, ma come abbiamo visto non tutti i soggetti positivi sviluppano malattia o sintomi clinici, che tra l’altro sono spesso aspecifici e sfumati: non solo debolezza, mucose pallide, letargia, perdita di peso, ma anche tachicardia / tachipnea, aborto in fattrici gravide e, a volte, costipazione intestinale per disordini vascolari del tratto enterico (5).

Dato che il quadro clinico è spesso complesso e sfumato, la PCR è indicata a conferma del sospetto diagnostico. Dobbiamo tuttavia sottolineare che la letteratura concorda nell’affermare che la semplice positività a questo test in assenza di sintomi clinici chiari non giustifica il trattamento con ossitetraciclina, che oltretutto non sempre riesce ad eliminare il micoplasma dall’ospite, pur essendo efficace nel miglioramento della sintomatologia e dei parametri ematologici (aumento di ematocrito, emoglobina e globuli rossi).

Emoparassiti

Theileria equi / Babesia caballi

La Piroplasmosi equina è una patologia causata da emoprotozoi parassiti che si localizzano negli eritrociti, causando emolisi in fase replicativa. La Theileria equi ha una fase replicativa e di quiescenza all’interno delle cellule della serie bianca, ed appare maggiormente resistente alle terapie. La trasmissione all’ospite equide avviene tramite zecche infette, che agiscono da riserva replicativa e propagano l’infezione con il pasto di sangue da un soggetto infetto ad un soggetto sano.

Possiamo riconoscere diverse forme di questa patologia:

• forma inapparente: questi pazienti mostrano bassi livelli di parassitemia e scarsi sintomi clinici, le fattrici possono trasmettere al feto la malattia e spesso sviluppano aborto
• forma cronica: questi pazienti mostrano segni clinici aspecifici e lievi, a carattere ricorrente
• forma subacuta / acuta: caratterizzata da febbre elevata, ittero, anemia, anoressia, coliche, decubito, insufficienza epatica e renale, tachipnea, debolezza, morte nei casi gravi.

 

La PCR è indicata in fase acuta quando il paziente mostra febbre, mentre nelle forme croniche o inapparenti è più attendibile   il   test   sierologico. È importante considerare un’eventuale sieroconversione nei soggetti con sospetto di malattia in aree endemiche, dove la semplice sieropositività non è diagnostica.

La differenziazione Thelieria equi / Babesia caballi è necessaria per impostare una corretta terapia, in quanto i protocolli previsti della somministrazione del farmaco (Imidocarb dipropionato) sono differenti per i due emoparassiti.

Si ricorda inoltre che l’asino risulta essere particolarmente sensibile agli effetti tossici del farmaco, quindi i dosaggi in questi casi devono essere particolarmente accurati.

I pazienti dopo trattamento e remissione della sintomatologia possono mostrare una PCR positiva a Theileria equi, dato che questo agente ha una fase quiescente nelle cellule della serie bianca, e quindi il trattamento farmacologico potrebbe non eliminare completamente il parassita dall’ospite.

 

Laboklin offre per Theileria equi e Babesia caballi sia la PCR su sangue e zecca – per la rilevazione dell’agente eziologico (con differenziazione), che un test sierologico

 

Anaplasma phagocytophilum (ex Ehrlichia equi)

Questo microrganismo si localizza nelle cellule della serie bianca (principalmente granulociti neutrofili o eosinofili) e si trasmette anch’esso tramite zecche. Dopo l’infezione si sviluppa una batteriemia che provoca la distruzione delle cellule della serie bianca, quindi causa pancitopenia, febbre, depressione, inappetenza, lieve ittero, lieve anemia, atassia, riluttanza al movimento.

Nelle forme acute (con febbre) può essere indicata una PCR su sangue, dato che il paziente è sicuramente in fase batteriemica, mentre nelle forme croniche o ricorrenti è più indicato un test sierologico, con valutazione della sieroconversione (per approfondimenti vedi Aktuell “Malattie da emoparassiti nel cavallo” – Luglio 2021).

 

Laboklin offre per Anaplasma phagocytophilum sia una PCR su sangue e zecca che un test sierologico

 

Altri patogeni

Hepacivirus

Si tratta di un gruppo di virus appartenenti alla famiglia dei Flavividae – la stessa famiglia che comprende il virus della West Nile Disease e il virus dell’epatite C nell’uomo. Quando infettano il paziente, determinano l’insorgenza di un’epatite generalmente subclinica a decorso cronico, con sintomatologia aspecifica come perdita di peso, diarrea intermittente, letargia, disoressia. La trasmissione può avvenire per via iatrogena tramite emoderivati infetti, probabilmente anche per contatto diretto tramite secrezioni o per via oro-fecale, anche alcuni vettori potrebbero essere coinvolti (insetti ematofagi, zecche ma anche roditori): gli studi epidemiologici sono ancora in corso.

La viremia può durare molti mesi, i virus si localizzano nel tessuto epatico (da biopsia o post-mortem) e vengono rilasciati in circolo, pertanto sono rilevabili nel siero e plasma dei soggetti colpiti.

La PCR è un test diagnostico affidabile (vedi Aktuell “Gli Hepacivirus nel cavallo”-Dicembre 2024).

 

Laboklin offre per Hepacivirus una PCR su siero, sangue e tessuto epatico.

 

Borrelia burgdorferi (Malattia di Lyme)

Questa spirocheta, trasmessa dalle zecche durante il pasto di sangue sull’ospite, può provocare la Malattia di Lyme nel cavallo. I sintomi sono molto vaghi ed aspecifici: possiamo avere debolezza, atassia, febbre, zoppie migranti, edemi agli arti, letargia, miosite, calo di performance.

Il test sierologico non permette una diagnosi di certezza, perché solamente il 10% dei soggetti sieropositivi sviluppa la malattia, e la diagnosi è spesso per esclusione di altre patologie. Il test sierologico che offriamo permette di misurare le IgM e le IgG, rendendo possibile valutare se l’infezione è recente (se abbiamo presenza di IgM) e quindi possa essere responsabile del quadro clinico riscontrato al momento dell’esecuzione del test, oppure più lontana nel tempo. La presenza di anticorpi risulta rilevabile dopo almeno 3 settimane dall’esposizione alla spirocheta, ma non si riscontra una correlazione certa tra entità del titolo anticorpale e malattia. La valutazione della sieroconversione potrebbe essere di ulteriore aiuto diagnostico nei casi dubbi.

La Borrelia burgdorferi si localizza dapprima in corrispondenza del morso del vettore, poi,una volta entrata nel circolo sanguigno, infetta i leucociti e le cellule delle membrane sinoviali, innescando nei soggetti sintomatici una reazione infiammatoria e autoimmunitaria grave, che peggiora la sintomatologia. Può verificarsi la localizzazione a livello di sistema nervoso (neuroborreliosi), nell’occhio (uveite), oltre alle classiche zoppie intermittenti dovute a poliartrite e polisinovite.

La PCR su liquido articolare / sinoviale in caso di artrite o edemi delle guaine tendinee, oppure su liquor in caso di forma neurologica, o sulla cute in caso di lesioni dermatologiche (papule e pustole nel punto di infezione), è più affidabile del test sierologico per la diagnosi.

E’ possibile anche testare le zecche e rilevare tramite PCR la presenza di Borrelia burgdorferi nell’artropode, permettendo la conferma epidemiologica (vedi Aktuell “Malattia di Lyme nel cavallo”-Maggio 2024).

 

Laboklin offre per Borrelia sia una PCR su liquido sinoviale, cute, liquor, zecca che test sierologico IgG+IgM e Immunoblot.

 

Dott.ssa Susanna Mereghetti

Patogeni neurologici

EHV1

Per la diagnosi in caso di forma neurologica data da virus erpetici (di solito causata  dal sierotipo 1 variante neurologica, (D752) ma in alcuni casi anche dal sierotipo senza variante  specifica, oppure dal sierotipo 4) è indicata la PCR su liquido cefalorachidiano, in quanto il virus si localizza nel tessuto nervoso. Il prelievo di liquor nell’animale in vita non è particolarmente complicato ed è possibile anche dallo spazio lombare, non solamente a livello cervicale, nell’animale in decubito o in anestesia. Post mortem è invece possibile effettuare questo test su tessuto cerebrale.

La forma neurologica si manifesta dopo la viremia, e una  semplice sieropositività non permette di diagnosticare con sicurezza questa patologia, la cui sintomatologia potrebbe essere causata da altri virus neurotropi o da fattori traumatici (vedi Aktuell ”Herpesvirus equino 1, 4” – Marzo 2021).

 

West Nile Virus / Encefalite da morso di zecca (TBE)

Si tratta di due patologie causate da virus della famiglia dei Flaviviridae, trasmessi tramite vettori (zecche o insetti ematofagi).

La West Nile Disease è una malattia neurologica causata dal Virus West Nile che si manifesta con febbre, decubito, encefalite, deficit neurologici gravi. La trasmissione avviene tramite gli insetti ematofagi che si infettano pungendo uccelli migratori viremici.

Per questa malattia disponiamo di un test sierologico che misura le IgG e le IgM, quindi possiamo agevolmente differenziare tra infezione recente (entro il mese di manifestazione della sintomatologia neurologica, testimoniato dalla presenza di IgM) e positività vaccinale o da infezione pregressa (testimoniate dalla presenza di IgG).

La PCR su sangue non è molto indicativa nel cavallo, perché la viremia è lieve e questo animale è fondo cieco dell’infezione, mentre è diagnostica  su liquido cefalorachidiano o su tessuto cerebrale.

Il controllo ambientale degli insetti ematofagi svolge un ruolo importante nelle strategie di prevenzione (vedi Aktuell “Il Virus West Nile nel cavallo: aggiornamenti” – Settembre 2023).

L’Encefalite da morso di zecca (TBE) è invece causata dal Virus dell’Encefalite da morso di zecca e si trasmette tramite artropodi del genere Ixodes, il cui controllo nelle zone endemiche assume particolare importanza.

I sintomi neurologici non sono patognomonici e la sola sieropositività non permette una diagnosi di certezza, pertanto dobbiamo sempre valutare la presenza di IgM per  diagnosticare un’infezione recente.

Laboklin offre per la West Nile un test che rileva IgG per Flavivirus e IgM specifico per West Nile Virus, oltre che una PCR su sangue intero o liquido cefalorachidiano. Per la TBE è possibile ricercare IgG e IgM da siero, ma anche IgG da liquor. La PCR per TBE può essere eseguita su liquido cefalorachidiano, siero e sulla zecca.

 

Malattia di Borna

La Malattia di Borna è causata da un Bornavirus, sembra  diffondersi tramite contatto diretto di secrezioni (saliva, urina, feci) da soggetto malato a soggetto sano, con probabilmente coinvolgimento di alcuni roditori. Il virus penetra generalmente nel sistema nervoso centrale tramite il nervo olfattorio, dando luogo a sintomi neurologici aspecifici di varia entità (sonnolenza, apatia, letargia, alterazioni comportamentali di vario genere).  In linea generale una sieropositività non è sufficiente per emettere la diagnosi, ma è necessario valutare la sieroconversione, oppure considerare una PCR su sangue intero o liquor / umor acqueo in fase acuta.

 

Patogeni causa di aborto

Herpesvirus 1,4

Le fattrici vengono di solito regolarmente vaccinate contro l’Herpesvirus 1,4 che può causare aborto e mortalità neonatale. Il vaccino in commercio è efficace nella prevenzione della viremia fetale, causa diretta della morte del feto e del conseguente aborto (il passaggio del virus in utero causa una vasculite e trombosi dei vasi con distacco placentale e aborto).

Se in una fattrice si sospetta un aborto da rinopolmonite, di solito l’esame sierologico non è indicato, proprio a causa delle vaccinazioni pregresse somministrate. Appare invece indicato un test PCR su invogli, fegato, milza e polmoni del feto espulso. Si consiglia quindi l’isolamento della fattrice interessata dall’aborto e l’eliminazione rapida del materiale abortivo, per evitare la disseminazione virale nell’ambiente.

 

Leptospira

La Leptospira è una spirocheta che viene diffusa tramite urina e feci di animali  malati e roditori infetti, si mantiene vitale negli ambienti umidi a temperature miti, quindi il periodo di massima diffusione corrisponde alla primavera e all’autunno.

La sintomatologia è variabile nel cavallo, può causare un’epatite o nefrite, oppure anche solamente aborto, con un decorso di infezione inapparente, o nascita di puledri disvitali con forme neurologiche (meningoencefalite). La Leptospira può causare un’uveite ricorrente nei pazienti adulti, anche dopo mesi o anni dall’infezione.

Nei casi cronici è indicato un test sierologico, dato che il soggetto colpito potrebbe aver già superato la malattia ed aver eliminato il batterio, mentre è diagnostica la PCR su sangue intero, urine, liquido oculare (camera anteriore) o materiale abortivo nelle forme acute, in caso di sindrome ittero-emorragica, nefrite, uveite o aborto. Questo test permette inoltre di identificare gli eventuali portatori sani eliminatori, che contribuiscono attivamente alla diffusione del batterio nell’ambiente (vedi Aktuell ”La Leptospirosi nel cavallo” – Febbraio 2024).

 

Arterite virale equina

L’Arterivirus causa l’arterite, quindi un’infiammazione con distruzione dell’endotelio vasale nel soggetto colpito.  La sintomatologia è molto varia: febbre ricorrente, abbattimento, ittero, fotofobia, edemi, sintomi respiratori e diarrea (nei puledri), mentre nelle fattrici gravide determina aborto a causa della viremia, che provoca stress fetale (1). La maggior parte dei soggetti colpiti supera la malattia con decorso subclinico o inapparente, ma può rimanere portatore / eliminatore del virus tramite le secrezioni nasali, oculocongiuntivali, urina nelle fasi acute della malattia e, nello stallone escretore, tramite il seme. Il virus rimane attivo anche nel materiale seminale refrigerato o congelato.

Lo stallone può rimanere escretore per molto tempo dopo aver superato la malattia sistemica, in quanto il virus si localizza nelle vie genitali maschili, mentre le fattrici contagiate tendono a eliminare il virus (anche dopo un aborto) nell’arco di un mese, rimanendo sieropositive.

Il test sierologico appare più indicato per le forme croniche, mentre la PCR su sangue intero è diagnostica per le forme acute con febbre e viremia. È possibile anche effettuare una PCR su sperma, tampone oculo-congiuntivale o nasale,   a seconda della sintomatologia prevalente. Negli stalloni con positività sierologica è richiesta una PCR negativa sul seme per poter dare inizio alla stagione riproduttiva (almeno due prelievi negativi a distanza di 15 gg), per escludere lo stato di escretore attivo.

 

Listeria

La Listeriosi non è molto frequente nella specie equina,  è causata da un batterio intracellulare  ubiquitario (Listeria monocytogenes) che può essere assunto dal terreno o da cibi contaminati da feci, urine, materiale abortivo infetto, oppure tramite aerosol o contatto diretto con le mucose. Le fattrici infette possono contagiare il neonato tramite il latte e per via transplacentale. Dopo l’ingresso del microrganismo nel tratto gastroenterico dell’ospite, questo si moltiplica provocando setticemia, dolori addominali, diarrea, febbre, meningoencefalite, aborto e – in alcuni casi – una cherato-congiuntivite ulcerativa.

È una zoonosi, e nell’uomo l’infezione si trasmette principalmente tramite assunzione di alimenti contaminati (1).

Laboklin offre un test sierologico per due sierotipi di Listeria, 1 e 4b, oltre alla PCR inclusa nel “Profilo aborto” da effettuarsi su materiale abortivo o tampone a secco.

 

Dott.ssa Susanna Mereghetti

La detenzione di rettili in cattività viene spesso intrapresa con l’obiettivo di riprodurre la specie in questione. Un prerequisito fondamentale per un allevamento di successo è la conoscenza del sesso degli animali. Inoltre, questa informazione è necessaria perché gli individui dello stesso sesso di molte specie possono manifestare comportamenti territoriali, in particolare al raggiungimento della maturità sessuale, che nei casi peggiori può sfociare in incontri aggressivi.

Sebbene molti rettili, tra cui numerose specie di serpenti, presentino un chiaro dimorfismo sessuale, questo è raramente evidente negli animali giovani, poiché generalmente si sviluppa solo nel tempo.
In molte specie, il dimorfismo sessuale si esprime pienamente solo al raggiungimento della maturità sessuale (Fig. 1).
Un esempio significativo è l’anaconda (genere Eunectes), in cui le femmine adulte crescono molto più grandi dei maschi. Un altro esempio è il crotalo di Wagler (Tropidolaemus wagleri), in cui, oltre al dimorfismo sessuale, è presente anche il bicromatismo sessuale, ovvero una differenza sesso-specifica nella colorazione e nel disegno.

Mentre la determinazione del sesso negli individui adulti di molte specie è relativamente semplice, diventa difficile negli animali subadulti o giovani.
Identificare correttamente il sesso dei piccoli è particolarmente importante, poiché questi animali vengono solitamente trasferiti a nuovi proprietari in questa fase iniziale.

Esistono diversi metodi manuali per la determinazione del sesso, ognuno dei quali presenta spesso i suoi svantaggi.

 

1. Popping

La cosiddetta tecnica del “popping” consiste nell’eversione manuale degli emipeni dei serpenti maschi dalle tasche emipeniene (Fig. 2). Questo metodo presenta lo svantaggio di essere spesso
applicabile solo a serpenti molto giovani, poiché gli emipeni degli individui più anziani non possono più essere eversi. Esiste anche un rischio considerevole di lesioni alla regione spinale a causa della flessione della coda e dell’applicazione di pressione immediatamente distale alla cloaca. Inoltre, esiste sempre il rischio di un’identificazione errata, poiché i maschi possono essere erroneamente classificati come femmine se l’eversione degli emipeni non riesce.

 

2. Sondaggio

Il sondaggio consiste nell’inserire una sonda metallica negli emipeni o nelle tasche emiclitoridee appena distalmente alla cloaca. La profondità di inserimento è misurata dal numero di squame sottocaudali attraversate dalla sonda. Le tasche emipeniene più profonde dei serpenti maschi consentono un inserimento maggiore della sonda. Lo svantaggio principale è che il sondaggio di serpenti molto piccoli non è semplice a causa del rischio di lesioni, come la perforazione dell’emiclitoride delle femmine (Fig. 3). Esiste anche sempre il rischio di un’identificazione errata, che può verificarsi in entrambe le direzioni.

 

3. Ispezione visiva

Alcune caratteristiche possono indicare il sesso di un serpente senza ulteriori manipolazioni. Tra queste, ad esempio, la forma della coda o i tratti sessuali visibili, come le tasche emipeniene sulle squame dorsali dei colubridi (Fig. 4). Tuttavia, questi metodi richiedono una notevole esperienza, sono altamente inaffidabili e devono essere applicati con grande cautela.

L’ipotiroidismo canino è considerato una classica endocrinopatia con manifestazioni cliniche caratteristiche. Nonostante i sintomi clinici apparentemente chiari, stabilire una diagnosi accurata rimane una sfida significativa.
Numerosi studi retrospettivi hanno dimostrato che fino al 70% dei cani trattati con levotiroxina (L-tiroxina) non presenta effettivamente ipotiroidismo. La sostanziale discrepanza tra il tasso diagnostico riportato e la prevalenza reale (stimata tra lo 0,07 e lo 0,23%) evidenzia la necessità di un approccio diagnostico più affinato.

Le malattie non tiroidee (NTI), gli effetti dei farmaci e le interpretazioni errate legate al metodo complicano ulteriormente il processo diagnostico. L’inizio indiscriminato della terapia con levotiroxina comporta il rischio di trascurare patologie sottostanti rilevanti e di aumentare inutilmente lo stress metabolico. In presenza di una concomitante malattia cardiaca o di un ipoadrenocorticismo non trattato/non riconosciuto, questo può portare a scompenso e può essere potenzialmente fatale.

In questa zona grigia diagnostica, nuovi approcci come la misurazione della T3 inversa (reverse-T3 – rT3) e l’analisi dei parametri rilevanti mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS) forniscono preziose opzioni diagnostiche aggiuntive.

 

Nozioni di base sulla fisiologia e diagnostica della tiroide

La funzione tiroidea è regolata dalla complessa interazione all’interno dell’asse ipotalamo-ipofisi-tiroide. Il TRH rilasciato dall’ipotalamo stimola la secrezione di TSH nell’ipofisi, che a sua volta stimola la tiroide a sintetizzare e secernere ormoni tiroidei, principalmente tiroxina (T4). Nel siero, oltre il 99% della T4 è legata alle proteine, con la T4 totale che comprende sia la frazione legata alle proteine che quella libera. Solo la frazione libera (fT4) viene assorbita dalle cellule, dove subisce una 5′-deiodazione ed è metabolizzata a triiodotironina (T3), l’ormone biologicamente attivo a livello cellulare.

In alternativa, fT4 può essere convertito in T3 inversa (rT3) biologicamente inattiva, che si ritiene svolga un ruolo nella regolazione cellulare e nella prevenzione di livelli eccessivi di T3 attiva.

Negli ultimi anni si è verificato un aumento dell’incidenza di numerose malattie infettive, sia a causa delle modificazioni climatiche che hanno dilatato i tempi e le zone di sopravvivenza degli eventuali artropodi vettori, che per effetto dell’aumento della vita media dei nostri pazienti, e delle intense movimentazioni (anche internazionali) degli equini sportivi.

Fortunatamente anche la diagnostica si è molto affinata negli ultimi anni, rendendo più comodi, rapidi e veloci i test diagnostici per queste patologie: vediamo in dettaglio quali test per quali malattie.

 

Test sierologici

Si basano sulla rilevazione di anticorpi nel siero di animali che hanno avuto un contatto con l’agente patogeno (virale, batterico o parassitario). Si tratta quindi di una metodica diagnostica indiretta, che comporta la scelta del momento idoneo per il prelievo (di solito alcuni giorni dopo l’insorgenza dei sintomi) e uno sforzo supplementare per l‘interpretazione dei risultati: una sieropositività infatti definisce un contatto diretto attuale o pregresso con l’agente eziologico ricercato, ma anche, semplicemente, una vaccinazione. Sono disponibili differenti metodiche: i test più moderni utilizzano la tecnica ELISA che è caratterizzata da sensibilità e specificità molto elevate e utilizza una reazione colorimetrica in presenza di anticorpi, mentre in assenza di anticorpi il campione non mostra alcun colore. Alcuni test utilizzati oltre alla classica ELISA (diretta/indiretta, reverse, competitive), sono l’immunofluorescenza indiretta (IFAT), l’inibizione dell’emoagglutinazione (HAH), l’agglutinazione (MAT), la fissazione del complemento (CFT), l’immunodiffusione in gel di agar (AGID), la sieroneutralizzazione virale (VN).

Per una diagnostica di certezza tramite test sierologici è necessario valutare la sieroconversione, ovverosia l’aumento significativo del titolo anticorpale per il dato patogeno in due prelievi distanziati di 15 / 45 gg uno dall’altro (vedi approfondimento “La diagnostica sierologica nella clinica equina: valutazione dei titoli anticorpali” – Aprile 2017), oppure considerare la presenza di IgM, che testimoniano un contatto recente (nei 20 gg precedenti) con l’agente eziologico cercato. In questo modo possiamo con ragionevole certezza ricondurre la sintomatologia corrente alla positività riscontrata.

Laboklin offre per molti test sierologici la rilevazione delle IgM, anche se la misurazione di questo tipo di anticorpi non è possibile per tutte le patologie.

 

PCR

Questa metodica, perfezionata negli anni 80 del secolo scorso, permette di rilevare nei liquidi biologici, in vari tessuti, in tamponi a secco la presenza di parti di DNA dell’agente eziologico ricercato, con cicli ripetuti di amplificazione in vitro. Questa tecnica si è evoluta con molteplici varianti (Real time, Nested, etc…) permettendo la rilevazione dei microrganismi per via diretta, senza basarsi sulla reattività del sistema immunitario del paziente.

Queste amplificazioni comportano una sensibilità maggiore rispetto alla coltura, in quanto i diversi cicli ripetuti vanno ad esaltare la presenza anche di piccole parti di DNA del patogeno ricercato nella matrice fornita. Non è possibile quindi rilevare alcuna informazione sulla virulenza o vitalità del microrganismo isolato e non per tutte le metodiche è possibile la sua quantizzazione.

L‘estrazione del genoma è possibile da molti materiali: sangue intero, siero, cute, croste e peli, tampone a secco (senza medium) proveniente da scoli, tessuti vari preferibilmente non fissati, feci, urina e sperma, liquidi cavitari, etc. in base alle caratteristiche peculiari della malattia (vedi approfondimento “La diagnostica PCR nella clinica equina”- maggio 2017).

Vediamo in dettaglio per le singole malattie quando è preferibile avvalersi del test sierologico e quando è invece indicato utilizzare una PCR per la diagnosi e su quale materiale.

 

Patogeni enterici

Clostridiosi

Per queste patologie abbiamo a disposizione delle PCR specifiche che utilizzano come matrice feci e contenuto gastrico, sia per la rilevazione dell’agente eziologico come Clostridium difficile / perfringens / botulinum che per le loro tossine: A, B, F e botulinica.

I test sierologici sono generalmente poco indicati per le clostridiosi enteriche, date le caratteristiche iperacute di questo gruppo di malattie, per le quali la presenza dell’agente patogeno nelle feci è sufficiente per la diagnosi ed è inoltre importante rilevare i soggetti diffusori asintomatici.

Per Clostridium botulinum disponiamo invece anche di un test sierologico per la ricerca della tossina e dell’agente patogeno in circolo, date le caratteristiche sistemiche della malattia.

 

Salmonella

Salmonella enterica è ricercabile tramite PCR su feci ed è anche disponibile un test sierologico per Salmonella abortus equi, da proporre alle fattrici che hanno abortito.

Non è disponibile invece la PCR sugli invogli fetali specifica per questo tipo di agente.

 

Coronavirus equino

Nell’equino l’infezione da Coronavirus si manifesta con una sintomatologia enterica e non prettamente respiratoria, quindi la diagnosi si effettua con una PCR su feci o su piccole biopsie intestinali di tessuto non fissato in formalina (vedi approfondimento “Coronavirus equini” – Aprile 2021).

 

Parvovirus, Lawsonia intracellularis, Rotavirus A e Rhodococcus oagii nel puledro

Si tratta di patogeni enterici caratterizzati da un decorso acuto di malattia con pesanti sintomi intestinali, per i quali Laboklin offre la PCR per la rilevazione dell’agente eziologico nelle feci o nel tessuto intestinale post-mortem. Possiamo rilevare anche Rhodococcus oagii nelle feci di puledri malati, sebbene la rodococcosi si presenti principalmente con sintomi respiratori ed ascessi polmonari: ne parleremo estesamente nel prossimo capitolo.

 

Patogeni respiratori

Streptococcus equi / zooepidemicus

Per la diagnosi di adenite da Streptococcus equi / zooepidemicus è indicata la PCR su lavaggio delle tasche gutturali e, come alternativa, da tampone nasale o da linfonodo ascessuale. Questa metodica permette inoltre di identificare i portatori sani eliminatori, che rappresentano un problema epidemio- logico importante e contribuiscono alla diffusione  del  batterio  nell’ambiente. E’ possibile anche una coltura da tampone con medium, con tempistiche però maggiori rispetto all’esecuzione della PCR.

Il test sierologico non è indicato, sia per l’esistenza del vaccino (anche se non presente in Italia) che per il fatto che la sieropositività testimonia un contatto con l’agente eziologico che potrebbe essere avvenuto anche molto lontano nel tempo, e quindi non particolarmente utile ai fini diagnostici.

 

Herpesvirus 1, 4

Le malattie erpetiche nel cavallo possono originare forme respiratorie, neurologiche, o abortive. Per la forma respiratoria da Herpesvirus 1,4 la PCR da tampone nasale è diagnostica nel caso di fase diffusiva, dato che il virus si localizza e viene escreto dalla mucosa nasale. Sappiamo però che i virus erpetici attraversano delle fasi variabili di quiescenza, pertanto la PCR su sangue – e potenzialmente anche da tampone nasale – è indicata in una fase acuta viremica e in presenza di febbre. Viceversa il test sierologico è maggiormente attendibile nelle forme croniche ricorrenti dato che la presenza di anticorpi (e un’eventuale sieroconversione) testimoniano che si è avuta viremia nel tempo intercorrente tra i due prelievi presi in esame.

Ricordiamo che l’interpretazione del test sierologico deve tener presente che sono disponibili in Italia dei vaccini somministrati principalmente per la prevenzione dell’aborto virale nelle fattrici gravide. Per le forme neurologiche e abortive è possibile l’esecuzione di PCR su liquor, umor acqueo e invogli fetali (le patologie causa di aborto verranno trattate nel prossimo approfondimento).

 

Herpesvirus 2, 5

L’infezione da Herpesvirus 2 causa prevalentemente forme respiratorie delle prime vie e oculari, mentre l’infezione da Herpesvirus 5 può causare patologie polmonari (EMPF, Fibrosi polmonare multinodulare equina). La diagnostica si avvale della PCR su tamponi nasali, oculo-congiuntivali, umor acqueo, fluidi da BAL / TW e parenchima polmonare per la polmonite nodulare. Anche in questo caso la diagnostica sierologica è maggiormente indicata nelle forme subacute / croniche ricorrenti. Una sieropositività al sierotipo 2 si riscontra frequentemente in soggetti affetti da altre patologie respiratorie e il suo significato patogeno non è ancora stato chiarito completamente.

 

Influenza A

Per la diagnosi dell’Influenza A è indicata la PCR su tamponi a secco del tratto respiratorio o da fluido da BAL. La diagnostica sierologica è utile per la valutazione del titolo anticorpale dopo vaccinazione, ma non particolarmente per la diagnosi di patologia, in quanto l’infezione naturale stimola prevalentemente un’immunità di tipo umorale mucosale e cellulo-mediata, difficilmente valutabile in laboratorio (vedi approfondimento “Valutazione dello stato vaccinale nel cavallo” – Agosto 2025).

 

Puledri: Rhodococcus oagii

Questo batterio intracellulare penetra nell’ospite dall’ambiente (dal terreno, tramite aerosol, dal pulviscolo e con le secrezioni di altri puledri malati) e si localizza principalmente nei macrofagi, distruggendoli. Di solito la rodococcosi si presenta nei puledri fino a 6 mesi di età con sintomi respiratori e ascessi polmonari, ma può avere occasionalmente diverse localizzazioni: intestinale (enterite o ascessi addominali), osteo-articolare (osteomielite, artrite settica o polisinovite immunomediata), oculare (hypopyon). Possiamo avere l’eliminazione intestinale del microrganismo non solo nelle forme enteriche, ma anche in quelle respiratorie, poiché viene ingerito con le secrezioni bronchiali o assunto dal terreno in ambienti fortemente contaminati.

La diagnostica in questi casi si effettua con una PCR su tampone nasale o da liquido da TW / BAL, feci, liquido articolare, umor acqueo, a seconda del distretto colpito.

Il test sierologico non è indicato perché si tratta di un patogeno con una scarsa reattività umorale, stimolando infatti prevalentemente un’immunià di tipo citotossico ne consegue che l’infezione attiva non sempre dà luogo ad una sieroconversione.

 

Dott.ssa Susanna Mereghetti