Il cane – La proteina C-reattiva (CRP) come standard di riferimento

Essendo una proteina di fase acuta (APP) fondamentale, la CRP aumenta di 50-100 volte entro 4-24 ore dopo l’esposizione a uno stimolo scatenante, raggiunge il suo picco massimo dopo 1-2 giorni e diminuisce rapidamente con un trattamento efficace. Grazie a questo andamento dinamico, la CRP è ideale per la diagnosi precoce, il monitoraggio della progressione della malattia e la valutazione del successo del trattamento.

Livelli elevati di CRP si riscontrano in una varietà di processi infiammatori e immunomediati, tra cui infezioni batteriche, infestazioni parassitarie,  malattie autoimmuni, neoplasie e alterazioni post-traumatiche o post-operatorie.
Nei cani con infezione acuta da Babesia canis, esiste una chiara correlazione tra CRP e gravità clinica e parametri ematologici.

Nell’ambito della gestione antimicrobica, è stato dimostrato che gli antibiotici possono essere sospesi una volta ottenuto un miglioramento clinico e la normalizzazione della concentrazione di CRP, riducendo significativamente la durata della terapia per molte patologie.

Nelle micosi sistemiche, come la coccidioidomicosi polmonare, la CRP in combinazione con l’Hp ha mostrato un valore predittivo per la remissione.

Tuttavia, la CRP può risultare elevata anche in assenza di una causa infiammatoria, ad esempio durante un’intensa attività fisica o in gravidanza; per questo motivo, l’interpretazione deve essere contestualizzata.

 

Tabella 1: Panoramica delle variazioni delle proteine di fase acuta e della conta leucocitaria in funzione del tempo trascorso dallo stimolo infiammatorio in cani e gatti.

Tempo da stimolo infiammatorio	Cane – ad es. CRP, SAA	Cane – conta leucocitaria	Gatto – ad es. SAA, AGP	Gatto – conta leucocitaria
0–6 h	inizialmente lieve aumento (la sintesi nel fegato inizia dopo alcune ore).	perlopiù ancora entro l’intervallo di riferimento	inizialmente lieve aumento	perlopiù ancora entro l’intervallo di riferimento
6–12 h	aumento significativo misurabile	tendenza iniziale verso un possibile aumento, spesso ancora al limite	aumento significativo misurabile	tendenza iniziale verso un possibile aumento, spesso ancora al limite
12–24 h	forte aumento, valori per lo più chiaramente patologici	leucocitosi/-penia è ora frequentemente visibile	forte aumento, chiaramente patologico	leucocitosi frequente, a volte leucogramma da stress
24–48 h	Picco APR – massima concentrazione	ulteriore aumento/plateau dei leucociti	Picco APR	ulteriore aumento/plateau dei leucociti
2–5 gg	declino incipiente, quando infiammazione sotto controllo	leucociti spesso ancora elevati, diminuiscono lentamente	declino con miglioramento clinico	leucociti spesso sono ancora alterati, normalizzano lentamente
> 5 gg	ritorno a valori di riferimento o a valori prossimi a quelli di riferimento in guarigione da infiammazione	normalizzazione, ma può richiedere più tempo a causa di processi cronici	simile al cane	simile al cane

APR = reazione di fase acuta, CRP = proteina C-reattiva, SAA = amiloide sierica A, AGP = alfa-1-glicoproteina acida

 

Indice di Fase Acuta (API) – marcatore combinato

La ricerca attuale combina i marcatori APP positivi (CRP, Hp) e negativi (albumina, eventualmente PON-1) in un Indice di Fase Acuta (API). Questo indice riflette l’attività infiammatoria complessiva.
I cani con tumori maligni e valori elevati di API presentavano una prognosi significativamente peggiore.

Nelle malattie infiammatorie croniche, ad esempio la leishmaniosi canina, i livelli di CRP e Hp rimangono costantemente elevati, mentre quelli di albumina e transferrina spesso diminuiscono. Le variazioni dell’API sono strettamente correlate alla risposta al trattamento e all’attività della malattia. Valori persistentemente elevati indicano attività residua, coinfezioni o fallimento del trattamento.

 

 

Il gatto – SAA e AGP sotto i riflettori

Nei gatti, la dinamica e il significato delle APP differiscono considerevolmente da quelli dei cani. La SAA è la principale APP più importante, mentre l’AGP è particolarmente importante per la diagnosi di FIP.

 

Siero amiloide A (SAA)

La SAA reagisce molto precocemente e con elevata sensibilità, raggiungendo rapidamente concentrazioni elevate ed è quindi adatta sia per la diagnosi precoce che per la valutazione prognostica. Un rapido declino indica una buona risposta alla terapia, mentre un valore stagnante suggerisce un’infiammazione persistente o un’infezione secondaria. I moderni test turbidimetrici con anticorpi monoclonali offrono un’elevata precisione diagnostica. Ulteriori studi dimostrano l’utilità della SAA, in particolare nelle infezioni batteriche come la pielonefrite.

 

Glicoproteina alfa-1-acida (AGP)

L’AGP è una proteina di fase acuta (APP) che aumenta moderatamente e ha un’elevata rilevanza clinica per la FIP (Fig. 1). Livelli elevati di AGP nel siero supportano la diagnosi sospetta in combinazione con altri riscontri. L’AGP mostra variazioni particolarmente dinamiche durante la terapia antivirale.

 

Aptoglobina (Hp)

Nei cani e nei gatti, l’Hp è una delle proteine di fase acuta a moderata espressione sintetizzate nel fegato. La sua funzione biologica principale è il legame ad alta affinità con l’emoglobina libera (Hb) proveniente dagli eritrociti lisati, riducendo così il danno ossidativo ai tessuti e prevenendo la perdita di ferro legato all’Hb. Durante i processi infiammatori acuti, entrambe le specie mostrano un aumento della concentrazione di aptoglobina significativamente meno pronunciato e più ritardato rispetto alle principali proteine di fase acuta come la SAA o la CRP. Come in altri mammiferi, l’emolisi intravascolare può portare a una diminuzione della concentrazione di aptoglobina perché la proteina viene rapidamente consumata legando grandi quantità di emoglobina libera.

 

Proteine di fase acuta negative

Albumina
L’albumina diminuisce a causa della ridistribuzione degli aminoacidi per la sintesi delle proteine di fase acuta positive e a causa dell’aumento della permeabilità capillare. È un indicatore prezioso di infiammazione sistemica, ma deve essere valutata tenendo conto di idratazione, perdita di proteine e funzionalità epatica. Nei cani, l’albumina è inclusa nel parametro API.

Transferrina
La transferrina, una proteina di trasporto che lega il ferro, diminuisce durante la fase di risposta parziale acuta (APR) per ridurre la disponibilità di ferro per i microrganismi. Nei cani, è stata osservata una marcata diminuzione della transferrina nelle infezioni batteriche. Una diminuzione significativa è stata documentata anche nei gatti con infiammazione cronica.

 

Proteine di fase acuta nella FIP

La peritonite infettiva felina (FIP) è una malattia infiammatoria solitamente associata a un aumento delle proteine di fase acuta.
Studi hanno dimostrato che la determinazione dell’AGP nel liquido essudativo è il metodo più significativo per differenziare i gatti con FIP da quelli senza. Sono stati definiti diversi intervalli di cut-off con sensibilità/specificità variabili (Tabella 2). Alcuni di questi intervalli di cut-off, ad esempio, in Helfer-Hungerbühler et al. (AGP > 2927), mostrano un’elevata specificità (97%) e possono quindi essere altamente indicativi di FIP.
Tuttavia, a causa della sua sensibilità relativamente bassa (54%), quasi la metà dei gatti affetti da FIP potrebbe non essere diagnosticata. Inoltre, va considerato che le APP possono aumentare anche in altre patologie. I gatti con addome settico e anche i gatti con neoplasie disseminate spesso mostrano concentrazioni di AGP altrettanto elevate quanto quelle dei gatti affetti da FIP. Pertanto, è importante eseguire un esame citologico e batteriologico supplementare per escludere diagnosi differenziali.

La sola misurazione dell’AGP non è quindi sufficiente per una diagnosi definitiva, ma rappresenta piuttosto uno dei tanti elementi necessari per giungere a una diagnosi.
L’AGP può anche svolgere un ruolo importante nel monitoraggio della terapia dei gatti affetti da FIP. Durante il trattamento, l’AGP diminuisce costantemente, ma più lentamente rispetto alla SAA. Ciò è presumibilmente dovuto alla maggiore emivita dell’AGP, motivo per cui la concentrazione di AGP al secondo giorno di terapia per la FIP può essere superiore rispetto a prima dell’inizio del trattamento. Una diminuzione significativa dell’AGP è stata osservata a partire dal settimo giorno dopo l’inizio della terapia. Entro il 28° giorno al più tardi, l’AGP era tornata entro i valori normali in quasi tutti i gatti (Helfer-Hungerbuehler 2024: (10) – 17/18 gatti e Zuzzi-Krebitz 2024: 37/39 gatti) e può quindi essere utilizzata come un buon parametro per monitorare il successo del trattamento.
Per quanto riguarda la SAA, una diminuzione significativa era già evidente al giorno 2 e la maggior parte dei gatti ha mostrato nuovamente concentrazioni di SAA (quasi) normali entro 4-7 giorni.
Addie et al. (2022) utilizzano l’AGP come marcatore per differenziare tra remissione e guarigione. La guarigione si riferisce alla completa cura della FIP, mentre la remissione è definita come uno stadio intermedio tra la guarigione e la morte, che comporta ancora il rischio di recidiva. I gatti completamente guariti mostravano livelli di AGP entro i valori normali, mentre i gatti in remissione mostravano livelli elevati di AGP. L’aumento dell’AGP potrebbe quindi indicare anche una potenziale recidiva di FIP.

 

Tabella 2: Panoramica delle pubblicazioni attuali sull’uso dell’AGP. Valori medi misurati (incluso l’intervallo) nei gatti con FIP rispetto ai gatti senza FIP, valori di cut-off definiti e relativa sensibilità e specificità.

Studio	Proteina di fase acuta	Valore medio in gatti con FIP (range)	Valore medio in gatti senza FIP (range)		cut-Off	Sensibilità (%)	Specificità (%)
	Siero
Hazuchova 2017	AGP (µg/ml)	2900 (960-5040)	690 (120-4500)		2260	85	90
	SAA (µg/ml)	98,5 (1,3-163,4)	7,6 (0,1-163,8)		97,3	55	87
	Hp (mg/ml)	2,0 (2,0-9,0)	1,8 (0,0-2,0)		2,0	55	82
	Versamento
	AGP (µg/ml)	2570 (1300-5760)	480 (190-3800)		1550	93	93
	SAA (µg/ml)	80,4 (0,1-207,4)	0,1 (0,1-182,7)		43,6	71	91
	Hp (mg/ml)	2,2 (0,1-9,3)	0,8 (0,1-2,5)		2,1	79	87
	Siero
Helfer- Hungerbuehler 2024	AGP (µg/ml)	2954 (200-5861)	sano	malato	2531	61	79
			235 (78-616)	1734 (305-3449)	2927	54	97
	Versamento
	AGP (µg/ml)	2425 (343-5611)	560 (83-3950)		1686	71	89
	Siero
Romanelli 2024	AGP (µg/ml)	1986 (405-4428)	296 (165-4254)		707	80	80
					>4099	–	100
					<438	100	–
	Versamento
	AGP (µg/ml)	1717 (549-3166)	233 (103-4099)		990	75	73
					>4254	–	100
					<296	100	–

 

 

Dott.ssa. Ruth Klein, Katharina Buchta

L’insidia diagnostica: NTI e limitazioni metodologiche

In un caso tipico, la diagnosi di ipotiroidismo canino si basa sulla combinazione di anamnesi compatibili, segni clinici, risultati ematologici e biochimici, insieme a una concentrazione di T4 inferiore all’intervallo di riferimento e un contemporaneo aumento del TSH.

Tuttavia, questo quadro non è presente in tutti i casi in cui si sospetta un ipotiroidismo. Molte malattie possono sopprimere secondaria-mente le concentrazioni di ormone tiroideo senza alcuna anomalia funzionale e/o strutturale della tiroide. Questa cosiddetta sindrome del malato eutiroideo (ESS o NTIS) è caratterizzata da basse concentrazioni di T4 e/o fT4 con TSH normale.
L’interpretazione di tali risultati è problematica senza ulteriori accertamenti diagnostici.

Ulteriori sfide derivano dalle concentrazioni inferiori di iodotironina specifiche per razza (ad esempio, levrieri, Basenji) e dall’interferenza di proteine leganti o autoanticorpi (tireoglobulina, T3, T4) con i kit immunoenzimatici di routine.
Inoltre, anche vari farmaci (ad esempio, glucocorticoidi, fenobarbital, sulfonamidi) possono influenzare i parametri tiroidei.

 

LC-MS/MS: un potenziale nuovo metodo di riferimento

La LC-MS/MS si è affermata come tecnica analitica altamente precisa. A differenza degli immunoenzimatici, la LC-MS/MS consente la quantificazione diretta e specifica di T4, T3 e rT3 senza interferenze da parte di autoanticorpi o farmaci. Questo la rende particolarmente preziosa nei casi diagnostici difficili. Ad esempio, mentre i test immunoenzimatici possono produrre risultati falsamente bassi o falsamente alti in presenza di autoanticorpi anti-tireoglobulina, la LC-MS/MS fornisce una rappresentazione affidabile della reale concentrazione ormonale.

Presso Laboklin, un metodo per la misurazione di T4, T3 e rT3 mediante LC-MS/MS è stato messo a punto e validato per la medicina veterinaria nell’ambito di una tesi di dottorato. Ciò consente una diagnosi altamente specifica, in particolare nei casi poco chiari. Può anche rappresentare un’opzione affidabile per il monitoraggio della terapia o in caso di sospetto ipotiroidismo nonostante le concentrazioni di T4 siano entro l’intervallo di riferimento.

Nell’interpretazione dei valori di T3 e T4 misurati mediante LC-MS/MS, è necessario tenere conto degli intervalli di riferimento specifici del metodo, poiché differiscono da quelli ottenuti con altre tecniche.

 

T3 inversa (rT3): distinguere l’NTI dall’ipotiroidismo

L’rT3 viene prodotto principalmente in caso di eccesso di T4 o quando la conversione in T3 attiva è sottoregolata. Nell’ipotiroidismo, solo quantità minime di T4 sono disponibili per la conversione, con conseguente riduzione delle concentrazioni di rT3. Al contrario, l’NTI porta tipicamente a livelli di rT3 normali o elevati: è disponibile una quantità sufficiente di T4, ma il fabbisogno fisiologico di T3 è contemporaneamente notevolmente ridotto (Fig. 1).

Studi iniziali confermano il valore diagnostico di questo parametro:

• rT3 < 50 pg/ml, in combinazione con una bassa concentrazione di T4, suggerisce fortemente
• rT3 > 109 pg/ml rende l’ipotiroidismo altamente improbabile, anche quando i livelli di T4 sono ridotti (Fig. 2).

 

Indicazioni

Questo parametro è particolarmente utile quando le concentrazioni di T4 o fT4 sono basse, ma non è presente un aumento del TSH per confermare il sospetto di ipotiroidismo. Questa situazione può verificarsi nel 20-30% dei cani con ipotiroidismo, ma più frequentemente indica una patologia non tiroidea (NTI).

 

Esperienze precedenti con il parametro

Un primo studio multicentrico su rT3 è stato presentato a un congresso internazionale (ECVIM) nel 2024.
Lo studio ha dimostrato che i cani sani, i cani con ipotiroidismo e quelli con basse concentrazioni di T4 secondarie a una patologia non tiroidea (NTI) potevano essere distinti in modo affidabile.
Un cut-off di 50 pg/ml è stato identificato come altamente specifico per la presenza di ipotiroidismo, mentre concentrazioni superiori a 109 pg/ml erano incompatibili con l’ipotiroidismo. Valori compresi tra queste soglie rappresentavano una zona grigia.
Per stabilire un intervallo di riferimento per rT3, Laboklin ha condotto uno studio su una popolazione più ampia di cani eutiroidei clinicamente sani. Questo studio ha determinato un intervallo di riferimento di 109–533 pg/ml.

Oltre agli studi condotti, sono ora disponibili dati di campo di grande valore.

Tra marzo 2024 e giugno 2025, il parametro rT3 è stato richiesto 3.052 volte presso Laboklin, di cui 1.887 richieste riguardavano solo rT3 e 1.165 sono state eseguite come parte di un profilo o come aggiunta ai parametri tiroidei inizialmente richiesti.

Tra i 491 casi con una concentrazione di rT3 inferiore a 50 pg/ml, anche la T4 è stata misurata nel nostro laboratorio in 289 casi. Di questi, il 92% dei cani presentava concentrazioni di T4 inferiori all’intervallo di riferimento, a conferma della stretta relazione funzionale tra triiodotironina inversa e tiroxina.

Solo in 22 casi (7,6%) con una concentrazione di rT3 inferiore a 50 pg/ml la concentrazione di T4 rientrava nell’intervallo di riferimento. Questo fenomeno può essere attribuito principalmente ai limiti degli immunodosaggi utilizzati di routine per la misurazione della T4 (ad esempio, Immulite 2000; Siemens, Germania). Risultati di T4 falsamente elevati possono essere dovuti alla presenza di autoanticorpi o a una qualità del campione non ottimale (campioni emolitici o lipemici). Questi fattori interferenti sono ben noti e possono complicare l’interpretazione dei risultati nella diagnostica di routine.

In 570 cani con concentrazioni di T4 contempora-neamente basse, i livelli di rT3 erano chiaramente entro l’intervallo di normalità (> 109 pg/ml). Tale risultato non supporta una diagnosi di ipotiroidismo, ma piuttosto indica una malattia non tiroidea (NTI). Naturalmente, una singola misurazione di parametri di laboratorio, anche altamente specifici, non può determinare in modo definitivo che questi cani non soffrissero effettivamente di ipotiroidismo, ma piuttosto di una malattia non tiroidea (NTI).
In tutti i casi che siamo stati in grado di esaminare in colloqui personali con i veterinari curanti, la valutazione è stata, tuttavia, confermata.

Studi precedenti ed esperienze cliniche suggeriscono un importante progresso nella diagnosi dell’ipotiroidismo canino. Il parametro sembra mantenere le sue promesse. Dovrebbe essere considerato uno strumento aggiuntivo nella cassetta degli attrezzi dell'”ipotiroidismo”. L’rT3 non è inteso come parametro di screening iniziale, ma piuttosto come un’aggiunta a un profilo tiroideo esistente. Di conseguenza, dovrebbe essere interpretato nel contesto dei risultati clinici e di altri parametri tiroidei (Fig. 3).

Per ulteriori accertamenti diagnostici, è possibile determinare autoanticorpi anti-tireoglobulina, T3 e T4 tramite profili tiroidei estesi. Un’altra opzione è la misurazione delle concentrazioni di T3 e T4 mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS), che non è influenzata da fattori interferenti come la qualità del campione o gli autoanticorpi, consentendo risultati più specifici e precisi.

 

Conclusione

La diagnosi precisa di ipotiroidismo canino richiede più della semplice valutazione di T4 e TSH. In particolare, la misurazione di rT3 e le analisi basate su LC-MS/MS forniscono informazioni cruciali in caso di incertezza diagnostica.

 

Dott.ssa Jennifer von Luckner, Dott. Niklas Wiesner, Dott.ssa Ruth Klein

 

I nostri servizi relativi all’ipotiroidismo

• T4, TSH, fT4
• T3, fT3
• rT3
• Profilo tiroideo (T4, fT4, T3, fT3, TSH, ATG, T4-AK, T3-AK)
• Profilo ipotiroidismo/NTI (T4, fT4, reverse T3, TSH)
• Monitoraggio tiroideo (T4, TSH, creatinina, SDMA, ALT, AP, Troponina I)
• Spettrometria di massa tiroidea (T4, T3, rT3 mediante HPLC-MS/MS)

Linfomi

Anche i linfomi si verificano regolarmente nelle cavie. Oltre al linfoma, è stata descritta anche una forma di leucemia nelle cavie.
La leucemia colpisce in particolare gli animali giovani adulti (di età inferiore ai 3 anni). Gli animali di solito muoiono entro poche settimane.
I 46 linfomi inclusi in questo studio erano localizzati prevalentemente nei linfonodi (n=31), ma anche nella pelle (n=11), negli organi interni (n=3) e nell’occhio (n=1).

Una forma particolare di linfoma cutaneo è il linfoma epiteliotropico cutaneo (sin. micosi fungoide). Si tratta di una malattia tumorale progressiva con caratteristica infiltrazione di linfociti T tumorali (cellule T della memoria) nell’epidermide e negli annessi (Moore, P.F. e Olivry, T., 1994). L’eziologia di questa malattia non è ancora completamente compresa. Questa forma di linfoma si manifesta anche nelle cavie e spesso inizialmente non viene riconosciuta come tumore.
Clinicamente, possono essere presenti eritema, alopecia e desquamazione. Pertanto, spesso si sospetta inizialmente una malattia cutanea. Solo con il progredire della malattia si possono sviluppare escrescenze nodulari (Fig. 6).

 

Tumori mammari

I tumori mammari della cavia, a differenza di altre specie animali, si verificano regolarmente anche nei maschi (Tabella 1) (Schöniger et al., 2025). Durante il periodo di studio, sono stati sottoposti a osservazione 157 tumori. Di questi, 75 tumori provenivano da animali femmine e 58 neoplasie da animali maschi.
Il sesso di 24 animali era sconosciuto. Sono stati diagnosticati 78 adenomi, 7 fibroadenomi, 71 adenocarcinomi e 1 carcinoma indifferenziato.

Tab.1: Distribuzione dei tumori mammari per genere

Diagnosi	Quantità	F	FC	M	MC	X
Totale	157	74	1	44	14	24
Benigni	85	47	–	17	7	14
Maligni	72	27	1	27	7	10

Legenda: F: femmina, FC: femmina sterilizzata, M: maschio, MC: maschio castrato, X: sconosciuto

 

Tumori uterini

A differenza dei conigli, le cavie presentano un’ampia gamma di alterazioni uterine.
Queste possono essere non neoplastiche/proliferative. Possono verificarsi tumori semplici benigni o maligni. Tuttavia, possono essere diagnosticati anche tumori misti (Laik-Schandelmaier et al., 2017).
Tra il 2013 e il 2020, sono stati sottoposti a diagnosi 60 tumori della regione uterina. Di questi, 37 erano benigni e 23 maligni. I tumori potevano essere suddivisi in 28 tumori epiteliali, 27 mesenchimali e 5 tumori misti. Tra le alterazioni epiteliali, 19 adenomi predominavano su 9 adenocarcinomi. Inoltre, tra le neoplasie mesenchimali sono stati riscontrati 17 leiomiomi, 8 leiomiosarcomi e 2 sarcomi indistinguibili. Al contrario, solo un tumore misto era benigno, mentre 4 sono stati diagnosticati come tumori misti maligni.

 

Tumori tiroidei

A differenza di altri piccoli mammiferi, le cavie presentano frequentemente anche tumori alla tiroide. Durante il periodo di studio, sono stati diagnosticati 15 adenomi e 14 carcinomi.

 

Conclusione

Nel presente studio sui tumori spontanei nelle cavie, predominano le neoplasie benigne del (sotto-)cute e delle mucose. Il lipoma è di gran lunga il tumore più comune, seguito dal tricofolliculoma.
I linfomi epiteliotropici cutanei possono essere clinicamente difficili da distinguere dalle malattie infiammatorie della pelle.
I tumori mammari si verificano sia nelle cavie femmine che nei maschi. Le femmine sterilizzate e i maschi castrati sono stati colpiti meno frequentemente rispetto alle cavie intere nello studio.

L’esame istopatologico è un esame importante per la valutazione prognostica delle dimensioni tumorali, poiché le neoplasie della mammella, dell’utero e della tiroide, in particolare, possono essere sia benigne che maligne.

Questo studio ha dimostrato che un tumore nelle cavie non significa necessariamente una condanna a morte per l’animale. In molti casi, la causa sottostante è benigna e, se individuato tempestivamente da un veterinario e rimosso il tumore, consente all’animale di continuare a vivere una vita sana.

 

Dott.ssa Claudia Schandelmaier

Esami disponibili sull‘argomento

– Istopatologia
– Citologia

1.   α1-Antitrypsin

L’α1-antitripsina (α1-AT) è una proteina appartenente alla famiglia degli inibitori della serina proteasi (serpine). Viene sintetizzata principalmente nel fegato e circola nel plasma sanguigno a concentrazioni relativamente stabili. La sua funzione fisiologica è quella di inibire gli enzimi proteolitici, in particolare l’elastasi neutrofila, al fine di prevenire il danno tissutale causato da eccessive risposte infiammatorie. L’α1-AT è di particolare rilevanza diagnostica nei casi di enteropatia proteino-disperdente (EPD).

A differenza di molte altre proteine, l’α1-AT è ampiamente resistente alla degradazione enzimatica nel tratto gastrointestinale. Quando la funzione di barriera intestinale è compromessa, ad esempio a causa di infiammazione o ulcerazione, l’α1-AT può fuoriuscire dal plasma nel lume intestinale e può essere rilevata intatta nelle feci. Ciò rende l’α1-AT un marcatore fecale ideale per identificare la perdita di proteine plasmatiche attraverso il tratto gastrointestinale. La rilevazione nelle feci indica una compromissione dell’integrità della barriera intestinale ed è considerata un marcatore di perdita di proteine intestinali.

 

Indicazioni
Nei cani, l’α1-antitripsina fecale è stata particolarmente studiata come marcatore precoce per lo sviluppo di enteropatia proteino-disperdente (EPD) in razze predisposte (ad esempio, Soft Coated Wheaten Terrier). Studi indicano che il marcatore può rilevare una disfunzione della barriera intestinale in una fase precoce, prima che si manifestino segni clinici o un’ipoalbuminemia rilevabile nel sangue.
Un’altra potenziale applicazione è nella valutazione dell’ipoproteinemia o dell’ipoalbuminemia. Poiché la EPD non si manifesta sempre con diarrea, l’α1-AT fecale può essere uno strumento utile per identificare la causa di tali anomalie nelle analisi del sangue. Nei pazienti con enteropatia cronica, concentrazioni elevate di α1-AT fecale sono indicative di una patologia intestinale più grave. Inoltre, il marcatore può essere utilizzato per il monitoraggio della terapia: valori in diminuzione durante il trattamento suggeriscono un miglioramento della funzionalità della barriera intestinale.

 

Punti da considerare
La misurazione viene in genere eseguita tramite ELISA. È possibile rilevare anche piccole quantità di α1-antitripsina che fuoriescono da una mucosa danneggiata. Tuttavia, sia la variazione diurna che la distribuzione non uniforme all’interno di un singolo campione fecale sono problemi noti. Ciò può comportare la segnalazione di concentrazioni basse o non rilevabili nonostante la presenza della malattia. L’analisi di tre campioni fecali consecutivi aumenta l’accuratezza diagnostica.

L’interpretazione delle concentrazioni fecali di α1-AT deve sempre essere effettuata nel contesto clinico. L’intervallo di riferimento è ampio ed è possibile una sovrapposizione con animali di controllo sani. Le fluttuazioni diurne e la distribuzione non uniforme nelle feci possono portare a risultati sia falsi positivi che falsi negativi. È inoltre importante considerare che le concentrazioni possono essere elevate in presenza di sanguinamento gastrointestinale o aumentata produzione di muco nell’intestino.
L’α1-antitripsina non fornisce informazioni sull’eziologia di una EPD: è un marcatore quantitativo di perdita proteica, non specifico per infiammazione o neoplasia.

 

α1-antitripsina nei gatti
Sono disponibili dati anche per i gatti, che indicano che le concentrazioni di α1-antitripsina possono essere significativamente elevate in caso di enteropatia cronica. Come per i cani, l’interpretazione deve sempre essere effettuata nel contesto clinico. Nel complesso, l’enteropatia cronica nei gatti sembra essere più frequentemente associata alla perdita di proteine intestinali rispetto ai cani. Di conseguenza, definire un’enteropatia proteino-disperdente (EPD) in questa specie è più difficile.

 

2. Calprotectina

La calprotectina è una proteina legante il calcio appartenente alla famiglia delle proteine S100, presente principalmente nei granulociti neutrofili.
Viene rilasciata in quantità maggiori durante i processi infiammatori. In caso di infiammazione gastrointestinale, la calprotectina viene secreta attraverso la mucosa intestinale nel lume e può quindi essere rilevata nelle feci.
La sua misurazione nei campioni fecali consente una valutazione non invasiva dell’attività infiammatoria nel tratto gastrointestinale, un metodo ben consolidato in medicina umana e sempre più applicato in medicina veterinaria.

Indicazioni
Nei cani, la calprotectina fecale viene utilizzata come marcatore per la malattia infiammatoria cronica intestinale. Studi hanno dimostrato che concentrazioni elevate sono correlate sia alla gravità delle alterazioni istologiche sia all’indice di attività clinica (CCECAI). Può essere utile per distinguere tra diarrea infiammatoria e non infiammatoria, valutare l’attività della malattia e monitorare la risposta al trattamento.

L’importanza della calprotectina risiede in particolare nella sua capacità di riflettere la gravità dell’enteropatia cronica. Studi hanno dimostrato che i cani con un CCECAI più elevato (ad esempio ≥12) presentano valori significativamente aumentati. Il parametro può fornire indicazioni sulla necessità di una terapia immunosoppressiva e supportare le valutazioni prognostiche. Maggiore è la concentrazione di calprotectina fecale, maggiore è la probabilità che il paziente richieda un trattamento immunosoppressivo. Nelle valutazioni di follow-up, la mancata normalizzazione dei livelli può indicare una remissione incompleta. Un nuovo aumento può verificarsi anche prima che il peggioramento clinico diventi evidente.

 

Punti da considerare
Come tutti i biomarcatori, la calprotectina non è specifica per una determinata malattia. Indica semplicemente la presenza e l’entità dell’infiammazione. Livelli elevati possono essere osservati anche in caso di infezioni batteriche, infestazioni parassitarie o malattie neoplastiche. L’interpretazione deve quindi sempre avvenire nel contesto clinico ed essere supportata da ulteriori indagini diagnostiche (ad esempio, imaging, endoscopia, istologia).
Concentrazioni di calprotectina fecale entro l’intervallo di riferimento non escludono la presenza di enteropatia. Questo è particolarmente rilevante nei cani, dove la risposta infiammatoria predominante tende ad essere linfoplasmocitaria piuttosto che neutrofila. Inoltre, molte enteropatie nei cani sembrano essere responsive al cibo e, in tali casi, non è prevista una forte risposta infiammatoria neutrofila, e quindi livelli elevati di calprotectina.

 

Calprotectina nei gatti
La calprotectina ha mostrato risultati promettenti anche nei gatti. Viene utilizzata come marcatore di supporto nei casi di diarrea cronica. Particolarmente rilevanti sono gli studi sul suo potenziale nella differenziazione tra processi infiammatori e neoplastici (ad esempio, linfoma di basso grado). Le concentrazioni di calprotectina fecale possono essere significativamente più elevate nei casi di linfoma; tuttavia, una differenziazione affidabile non è stata ancora chiaramente dimostrata.

 

3. Zonulina

La zonulina è una proteina endogena che svolge un ruolo centrale nella regolazione della permeabilità intestinale. Controlla la permeabilità delle giunzioni strette, ovvero quelle connessioni cellulari che collegano le cellule epiteliali intestinali e quindi prevengono l’intrusione di sostanze indesiderate.
Un aumento del rilascio di zonulina porta all’allentamento di queste giunzioni, con conseguente aumento della permeabilità intestinale, una condizione comunemente nota come “intestino permeabile“.
In condizioni fisiologiche, la zonulina consente un’apertura temporanea della barriera intestinale, ad esempio per la sorveglianza immunitaria o i processi di trasporto. Questa regolazione è finemente calibrata e normalmente reversibile.
Si verificano condizioni patologiche quando questa apertura è prolungata o eccessiva, consentendo il passaggio di componenti batteriche, tossine o proteine alimentari non completamente digerite nei tessuti.

 

Indicazioni
La zonulina è stata identificata come un potenziale marcatore dell’integrità della barriera intestinale. Livelli elevati di zonulina fecale o sierologica sono stati descritti in particolare nei cani con enteropatia cronica, allergie alimentari o malattie infiammatorie intestinali. Studi indicano che un’espressione disregolata di zonulina è associata a un aumento della permeabilità intestinale, ovvero a un meccanismo di barriera alterato. La determinazione della zonulina offre quindi una visione non invasiva della funzionalità della mucosa intestinale. Nonostante la quantità attualmente limitata di dati clinici disponibili per i piccoli animali, la misurazione della zonulina apre nuove prospettive diagnostiche e terapeutiche per un approccio olistico alle patologie gastrointestinali.

 

Cosa considerare
La zonulina non è un marcatore specifico per una determinata patologia. Come per molti biomarcatori più recenti, i risultati devono essere interpretati nel contesto clinico generale.
Valori elevati da soli non consentono una diagnosi, ma possono fornire indicazioni di disturbi funzionali della barriera. Fattori come stress, farmaci, età o dieta possono influenzarne la concentrazione.

 

Zonulina nei gatti
Studi pilota iniziali sui gatti suggeriscono che la proteina potrebbe anche svolgere un ruolo nelle enteropatie croniche feline (ad esempio, enterite linfoplasmacellulare o linfomi di basso grado).

 

4. Immunoglobulina A secretoria fecale (sIgA)

L’immunoglobulina A (IgA) è una componente centrale della difesa immunitaria della mucosa. Viene prodotta come IgA secretoria (sIgA) dalle plasmacellule nella lamina propria dell’intestino e attivamente trasportata attraverso l’epitelio nel lume intestinale. Lì, forma una prima linea di difesa contro i microrganismi patogeni senza innescare risposte infiammatorie. Le sIgA agiscono quindi come “buttafuori”, proteggendo la mucosa dall’adesione batterica, dall’attività delle tossine e dall’invasione. Le IgA secretorie si legano agli antigeni di superficie di batteri, virus o tossine e li neutralizzano prima che entrino in contatto con le cellule epiteliali. A differenza delle IgG o delle IgM, le IgA non attivano il sistema del complemento e quindi non sono infiammatorie. Ciò è essenziale per la tolleranza immunologica nell’intestino, dove sono costantemente presenti numerosi antigeni innocui (ad esempio componenti alimentari, commensali).

 

Indicazioni
Una ridotta concentrazione nelle feci può indicare un’immunodeficienza funzionale della mucosa intestinale. Una ridotta produzione di sIgA è stata particolarmente descritta nei Pastori Tedeschi con enteropatia cronica.

 

Cosa considerare
Le sIgA sono considerate un indicatore di immunocompetenza della mucosa intestinale, sebbene l’interpretazione debba essere valutata con cautela, poiché possono essere influenzate da età, stress, dieta e anche dalla manipolazione del campione.
La misurazione deve essere eseguita su campioni fecali il più freschi possibile.

sIgA nei gatti
I dati sulle sIgA fecali nei gatti sono ancora limitati.
Tuttavia, studi iniziali suggeriscono che concentrazioni ridotte di sIgA nelle feci possono verificarsi in caso di malattie intestinali croniche, come l’enterite infiammatoria o il linfoma intestinale.

 

5. Elastasi pancreatica canina 1

L’elastasi è un enzima proteolitico prodotto nel pancreas esocrino e rilasciato nell’intestino tenue con il succo pancreatico. La sua funzione principale è la degradazione dell’elastina, una proteina strutturale del tessuto connettivo. Nella diagnostica, tuttavia, la sua attività enzimatica è di minore importanza rispetto alla rilevazione di quantità stabili di elastasi nelle feci, che consente di trarre conclusioni sulla funzione pancreatica esocrina. A differenza di molti altri enzimi pancreatici, l’elastasi nel lume intestinale è ampiamente resistente alla degradazione enzimatica, agli acidi biliari e all’influenza batterica. Viene escreta immodificata nelle feci e può essere rilevata mediante test immunologici (ELISA), il che la rende un marcatore non invasivo della funzione pancreatica esocrina.
Nei cani, la misurazione dell’elastasi pancreatica 1 è un utile strumento di screening, in particolare nei pazienti con segni gastrointestinali aspecifici. Può servire come test integrativo o preliminare per determinare l’immunoreattività specifica tripsina-simile (cTLI). Valori normali di elastasi generalmente escludono un’insufficienza pancreatica esocrina (EPI) clinicamente rilevante. Valori significativamente ridotti possono indicare una disfunzione esocrina, ma è necessaria la conferma con la cTLI sierica.
Basse concentrazioni di elastasi fecale possono verificarsi, ad esempio, a causa dell’effetto diluitivo nella diarrea e pertanto non sono di per sé conclusive per l’EPI. Basse concentrazioni possono essere osservate anche in cani sani. Una concentrazione di cTLI entro l’intervallo di riferimento depone contro la presenza di EPI, anche se l’elastasi fecale è molto bassa. Solo in casi molto rari l’EPI è accompagnata da basse concentrazioni di elastasi fecale, ma concentrazioni di cTLI normali o al di sotto della norma.
Ciò può verificarsi in situazioni come l’occlusione del dotto pancreatico (il pancreas stesso rimane funzionale, ma gli enzimi non raggiungono l’intestino), o quando il prelievo di sangue per la cTLI non viene eseguito a digiuno o si verifica durante un episodio di pancreatite (l’enzima residuo ancora presente viene rilasciato nel sangue).

 

6. Acidi biliari (totali)

Gli acidi biliari vengono sintetizzati nel fegato e secreti nell’intestino tenue durante la digestione.
Circa il 95% viene riassorbito nell’ileo. L’interruzione di questo riassorbimento, ad esempio a causa di un’infiammazione cronica, porta a un aumento della quantità di acidi biliari primari nel colon, che può scatenare diarrea secretoria. Analogamente, la disbiosi con ridotta conversione in acidi biliari secondari da parte di Clostridium hiranonis (rinominato Peptacetobacter hiranonis) può influenzare questi processi.

 

7. Indagini sulla disbiosi

Il microbiota intestinale svolge un ruolo chiave nella patogenesi delle enteropatie croniche. I test sulla disbiosi quantificano le specie batteriche marcatrici rilevanti (ad esempio Faecalibacterium, Turicibacter, Clostridium hiranonis) utilizzando metodi basati sulla PCR e ne valutano lo scostamento dallo stato fisiologico. Un punteggio alterato indica un’alterazione dell’omeostasi microbica e può avere rilevanza prognostica.

 

Conclusione

Negli ultimi anni, la valutazione dei biomarcatori fecali è diventata sempre più integrata nella diagnosi e nel monitoraggio terapeutico delle enteropatie croniche. Mentre l’α1-antitripsina e la calprotectina possono fornire indicazioni dirette di perdita proteica e infiammazione, altri possono offrire informazioni aggiuntive sull’integrità funzionale e microbica dell’intestino. Il loro uso mirato può fornire una base per decisioni terapeutiche, valutazioni di follow-up e prognosi. Rimane essenziale interpretare i risultati nel contesto clinico e, ove appropriato, combinare diversi parametri per migliorare il valore diagnostico.

 

 Dott.ssa Jennifer von Luckner

Clinicamente, la melanosi iridea e gli stadi precoci della FDIM sono indistinguibili. La transizione dalla melanosi iridea alla FDIM maligna può essere determinata solo mediante esame istologico.
Nella melanosi iridea, i melanociti sono limitati esclusivamente agli strati esterni della superficie dell’iride. Non appena i melanociti atipici si diffondono nello stroma dell’iride, le lesioni progrediscono in FDIM. In questa fase, le caratteristiche cliniche includono ispessimento dell’iride, alterazioni della forma della pupilla (discoria) e ridotta mobilità pupillare.

La malattia può progredire lentamente o rapidamente. Attualmente, non esiste un metodo valido per prevedere la velocità di progressione, poiché i fattori che accelerano la progressione della malattia sono sconosciuti. In caso di progressione lenta, uno dei primi segni è un aumento del numero o delle dimensioni delle macchie nere nell’iride.La superficie dell’iride appare quindi irregolare e non più liscia.
Con il progredire della malattia, si verifica una crescita localmente invasiva nei tessuti adiacenti (Fig. 2A e B). Le masse tumorali possono diffondersi in varia misura all’iride, all’angolo camerulare e al corpo ciliare; in alcuni casi, sono interessati l’intero bulbo oculare e i tessuti adiacenti. Se si verifica un’ostruzione del deflusso nell’angolo camerulare, il drenaggio dell’umor acqueo non funziona più e si sviluppa un glaucoma secondario.

Nei casi avanzati, possono formarsi metastasi. Mentre le metastasi intraoculari probabilmente si formano per esfoliazione delle cellule tumorali nell’umore acqueo, la via più probabile per le metastasi extraoculari è la diffusione ematogena attraverso il plesso venoso sclerale, motivo per cui l’invasione delle cellule tumorali nel plesso è un importante fattore prognostico. Le metastasi sono più comunemente segnalate negli organi addominali, in particolare nel fegato. Ma possono essere colpiti anche la milza, i linfonodi, le ossa e i polmoni.

I dati sul potenziale metastatico sono scarsi. I dati sulle metastasi variano dal 19% al 63%. Tuttavia, questi studi spesso si riferiscono a un numero limitato di casi o includono un numero relativamente elevato di casi in stadio avanzato. Poiché ciò può portare a una sovrastima errata dell’incidenza di malattia metastatica, tali risultati devono essere interpretati con cautela. Sebbene possano trascorrere diversi anni tra la diagnosi di FDIM e il decesso per metastasi, la prognosi della malattia rimane cauta.

 

Indicatori prognostici negativi per la comparsa di metastasi nella FDIM:

• Conta mitotica > 7/HPF (campo ad alto ingrandimento)
• Invasione del plesso venoso sclerale, della coroide e del tessuto connettivo circostante
• Necrosi intratumorale
• Glaucoma secondario

Attualmente, l’unica opzione terapeutica è l’enucleazione. Terapie adiuvanti per la malattia metastatica dell’FDIM, come quelle utilizzate per il melanoma canino, non sono disponibili. La diagnosi di melanosi iridea deve essere interpretata con cautela, poiché queste lesioni possono progredire piuttosto rapidamente e diventare maligne. Si raccomandano pertanto controlli clinici di follow-up regolari e approfonditi.

 

Tumori melanocitici dell’uvea anteriore del cane

I tumori melanocitici canini dell’uvea anteriore sono i tumori intraoculari primari più comuni nei cani. I cani di mezza età e anziani sono più comunemente colpiti, ma possono insorgere a qualsiasi età.
Non è nota una predisposizione di razza o sesso.
Le neoplasie melanocitiche uveali canine sono generalmente classificate come benigne, a differenza del melanoma diffuso dell’iride felino. Nonostante il loro comportamento biologico generalmente benigno, anche in questo caso viene comunemente utilizzato il termine “melanoma”.
Tuttavia, secondo la classificazione dell’OMS, le varianti benigne dovrebbero essere più correttamente chiamate melanocitoma e melanoma maligno.

L’aspetto clinico dei tumori melanocitici uveali canini è molto variabile e spesso colpisce l’iride, il corpo ciliare o entrambe le strutture. La coroide è raramente coinvolta. La diffusione locale del tumore porta spesso al glaucoma, simile alla variante felina. Il melanocitoma canino benigno dell’uvea anteriore presenta un quadro relativamente uniforme, indipendentemente dall’esatta sede intraoculare di origine del tumore. Tipicamente, questi tumori sono altamente pigmentati e composti da cellule poligonali fusiformi o paffute che presentano minime atipie cellulari e nucleari (Fig. 3B). Le figure mitotiche sono rare o assenti. Molti melanocitomi uveali canini si diffondono lungo il reticolo corneosclerale e crescono nello stroma corneale. Inoltre, anche la sclera e il tessuto extrasclerale sono spesso infiltrati da questi tumori (Fig. 3A).

Ad esempio, i melanocitomi uveali canini dell’uvea anteriore, sebbene classificati come benigni, mostrano regolarmente una crescita localmente invasiva.
Quest’ultima è spesso considerata un segno di malignità in altri tumori. Tuttavia, le segnalazioni di metastasi nei tumori melanocitari uveali canini dell’uvea anteriore si riscontrano solo in una piccola percentuale di casi, motivo per cui la crescita localmente invasiva non è un criterio affidabile per la malignità e per distinguere tra comportamento benigno e maligno.

Al contrario, la conta mitotica è un fattore più importante nel determinare la malignità, poiché le metastasi si verificano soprattutto nei casi con una conta mitotica elevata (> 4/10 HPF, campi ad alto ingrandimento).

Tuttavia, a parte la conta mitotica, attualmente non sono noti altri criteri istologici in grado di predire il comportamento biologico maligno. In generale, le atipie cellulari e nucleari sono pronunciate nelle rare varianti maligne (melanomi) e i tumori sono spesso solo molto lievemente o per niente pigmentati, il che a sua volta complica la diagnosi. In questi casi, l’esame immunoistologico può essere utile per confermare l’origine melanocitaria delle cellule tumorali.

 

Conclusione

Nei tumori melanocitici uveali sia canini che felini, è difficile distinguere tra forme/precursori benigni e tumori uveali maligni basandosi esclusivamente sulle caratteristiche cliniche (Tabella 1). I gatti con iperpigmentazione dell’iride devono essere sottoposti a un esame clinico generale completo e a una visita oculistica specialistica. Per distinguere tra melanosi iridea e stadi precoci di melanoma diffuso felino dell’iride, è necessario un esame istologico. Ulteriori tecniche di imaging, come ecografia, TC o RM, sono consigliabili per valutare l’entità dell’invasività e la presenza di metastasi, soprattutto perché il rischio di metastasi è maggiore nel melanoma diffuso felino dell’iride rispetto al melanocitoma canino dell’uvea anteriore.

 

Tabella 1: Panoramica delle caratteristiche cliniche del melanoma diffuso felino dell’iride e del melanocitoma canino dell’uvea anteriore

	Melanoma diffuso felino dell‘iride	Melanocitoma canino dell‘uvea
Andamento	maligno	benigno (multiplo)
Crescita locale invasiva	sì, indice di malignità	sì, ma nessun criterio attendibile di malignità
Potenziale metastatico	sì	no
Progresso della malattia	molto variabile	lento
Prognosi	cauta	buona dopo enucleazione

 

I cani con tumori melanocitici dell’uvea anteriore hanno una prognosi favorevole nei casi benigni (melanocitomi) in termini di aspettativa di vita, sebbene spesso venga raccomandata l’enucleazione.

In alcuni casi, i tumori mostrano una conta mitotica > 4/10 HPF, che porta alla classificazione come melanoma. I melanomi hanno una prognosi cauta perché è più probabile che presentino un comportamento maligno, con rapida progressione e metastasi.

Sono necessarie ulteriori ricerche per comprendere meglio i fattori e i meccanismi che influenzano la progressione del melanoma diffuso felino dell’iride e prevedere con precisione il rischio di metastasi nei tumori melanocitici canini dell’uvea anteriore.

 

I nostri servizi relativi alle neoplasie

• Istopatologia
• Istopatologia:richieste speciali
• Citologia
• Analisi immunoistologiche
• e altro ancora

Dott.ssa Cynthia de Vries, DVM, Dipl. ECVP e
Dott.ssa Christina Stadler, Patologa Veterinaria

Esame colturale

Per i test batteriologici, i tamponi vengono strisciati su Columbia Blood Agar ed Endo Agar in laboratorio e poi immersi in brodo di arricchimento. Le piastre vengono incubate in aerobiosi a 36 ± 1 °C e la crescita batterica viene controllata dopo 16-24 e 48 ore. Dopo 16-24 ore di incubazione a 36 ± 1 °C, il brodo di arricchimento viene anch’esso strisciato su Columbia Blood Agar ed Endo Agar e incubato in aerobiosi a 36 ± 1 °C per ulteriori 16-24 ore. Le colonie batteriche cresciute vengono identificate o differenziate visivamente o utilizzando il metodo MALDI-TOF.

Per l’esame micologico, i tamponi vengono ulteriormente distribuiti su agar selettivo fungino. L’incubazione avviene a 36 ± 1 °C per un massimo di 7 giorni. I funghi cresciuti vengono differenziati macroscopicamente, microscopicamente o utilizzando il metodo MALDI-TOF.

 

Microbioma auricolare

L’orecchio medio quando sano è privo di germi. Anche in condizioni di salute, l’orecchio esterno contiene una piccola quantità di flora mista che fa parte del microbioma cutaneo fisiologico. Tra questi rientrano Staphylococcus (S.) aureus, Streptococcus spp., Enterococcus spp., Bacillus spp. e singole Malassezia spp. (Reuschel 2018, Galuppi et al. 2020).

In caso di cambiamenti ambientali e alterazioni patologiche, aumenta in particolare il numero di patogeni Gram-negativi e anaerobi. In due recenti studi tedeschi, sono state isolate fino a 55 specie batteriche appartenenti a 12 famiglie (Hein et al. 2021), con S. aureus (30%) come il più frequentemente rilevato, seguito da Pseudomonas aeroginosa, Pasteurella multocida, Enterobacter cloacae, E. coli, S. haemolyticus, Klebsiella oxytoca e Pasteurella spp. (Reuschel 2018, Hein et al. 2021).

Fino al 50% delle infezioni dell’orecchio risultano negative nonostante i riscontri macroscopici (Reuschel 2018, Hein et al. 2021), sia a causa di un campionamento superficiale del pus che di un precedente trattamento. Pertanto, l’ultimo farmaco (inclusi detergenti auricolari e antibiotici sistemici) dovrebbe idealmente essere stato somministrato almeno 5 giorni prima.

Il prerequisito per una coltura efficace e un risultato significativo è un campione profondo e privo di contaminazioni prelevato prima di iniziare la terapia.

 

Conclusione

L’otite grave può spesso essere prevenuta con una diagnosi precoce e un trattamento mirato. L’esame dell’orecchio e la citologia sono i primi passi.

Dott.ssa Corinna Hader, Jutta Hein

 

 

I nostri test per le otiti
#174 #204	Ectoparassiti (microscopia) Citologia
#150 #1061 #156 #725	Batteriologia (aerobi) Batteriologia (aerobi + anaerobi) Batteriologia + micologia + evtl. antibiogramma
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Flottazione / Sedimentazione

Nella flottazione, le cisti vengono gravemente danneggiate dall’elevato contenuto salino della soluzione di flottazione. Un metodo più adatto è l’arricchimento con SAFC (concentrazione di acetato di sodio-acido acetico-formalina), un processo di sedimentazione specializzato. Per aumentare la sensibilità di questo metodo di rilevamento microscopico, è necessario raccogliere un campione di feci nell’arco di 2-3 giorni, poiché l’escrezione delle cisti varia notevolmente in intensità ed è intermittente. Nel metodo di arricchimento SAFC, le cisti tipiche appaiono con un guscio sottile e un bastoncino assiale. Sono solitamente facilmente riconoscibili con un ingrandimento di 400x (Fig. 2).

Esiste il rischio di confusione, in particolare con i lieviti, che possono avere forma e dimensioni simili ma, a differenza della Giardia, sono privi di nuclei o corpi mediani. La microscopia è meno sensibile della rilevazione immunologica. Questo aspetto deve essere tenuto in considerazione nella scelta del metodo diagnostico.

 

Metodica immunologica

IFAT (Test anticorpale a fluorescenza indiretta)
Le cisti escrete e arricchite con il metodo SAFC possono essere colorate con una tecnica a fluorescenza e quindi rilevate più facilmente al microscopio utilizzando speciali filtri luminosi (Fig. 3).

EIA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
Le due principali proteine della parete cistica (Cyst- Wall-Proteins), CWP-1 e CWP-2, si combinano per formare un grande eterodimero, il cosiddetto antigene specifico di Giardia, GSA-65. Questo viene poi rilevato mediante un immunodosaggio enzimatico (EIA).
Grazie all’amplificazione enzimatica della reazione cromatica, l’EIA presenta una maggiore sensibilità e, grazie alla fase di lavaggio, una maggiore specificità rispetto ai test di immunodosaggio non enzimatici (NEIA), come quelli utilizzati nei test rapidi nella pratica clinica. I test copro-antigenici disponibili possono quindi presentare risultati diversi, ma sono nel complesso significativamente più sensibili della rilevazione microscopica delle cisti di Giardia. Ciò significa che anche in caso di temporanea cessazione dell’escrezione delle cisti, è possibile formulare una diagnosi utilizzando un campione di feci. La sensibilità e la specificità di questi ELISA sono pari a circa il 98%.

 

PCR

In questo caso, il rilevamento biologico molecolare del DNA specifico di Giardia da cisti arricchite viene eseguito utilizzando la PCR o la copro-PCR diretta.
La sensibilità è simile a quella del rilevamento tramite ELISA. Gli inibitori nelle feci possono portare a risultati falsi negativi.

La PCR è particolarmente utile nei campioni positivi per distinguere tra diversi assemblaggi al fine di escludere ceppi patogeni umani in un animale positivo.

 

Risultati delle diverse metodiche diagnostiche

EIA

L’antigene specifico della Giardia è stato rilevato nel 12,5% dei campioni di cane e nel 10,8% dei campioni di gatto utilizzando l’EIA (Fig. 4).

 

IFAT

Il tasso di rilevamento mediante immunofluorescenza dopo arricchimento con SAFC è stato del 14% nei cani e del 7,9% nei gatti. In questo caso, è stato anche possibile indicare la quantità di cisti in modo semiquantitativo (Fig. 5).

 

PCR 

Il tasso di rilevamento dei campioni positivi alla Giardia mediante PCR è stato del 22,6% nei cani e del 7,6% nei gatti (Fig. 6).

 

Valutazione

La scelta del metodo di test appropriato dipende da diversi fattori. In presenza di sintomi clinici come diarrea e vomito, l’esame parassitologico mediante flottazione e l’individuazione di Giardia mediante EIA sono sempre raccomandati come primo passo, utilizzando un pool di campioni fecali.
Tra questi, l’EIA è più sensibile della flottazione.
È possibile anche la rilevazione dell’antigene mediante IFAT.
Se è necessaria la differenziazione degli aggregati di Giardia, la PCR è il metodo di scelta.

Se il risultato parassitologico è negativo, è necessario effettuare ulteriori indagini diagnostiche per chiarire la causa dei sintomi.

Anche dopo il successo del trattamento, i risultati dell’EIA possono rimanere positivi, poiché il metodo rileva anche Giardie non vitali (morte). Lo stesso vale per la PCR, che è ancora più sensibile e può rilevare il DNA per diversi giorni dopo il trattamento.
L’escrezione di cisti infettive a seguito di una terapia efficace può essere dimostrata in modo più affidabile mediante IFAT dopo l’arricchimento con il metodo SAFC.

 

Trattamento

Secondo le linee guida ESCCAP (European Scientific Counsel Companion Animal Parasites), il trattamento dei portatori di Giardia clinicamente asintomatici è generalmente sconsigliato. Tuttavia, è indicato negli animali che presentano sintomi gastrointestinali.

In Germania, i medicinali veterinari contenenti i principi attivi fenbendazolo e metronidazolo sono autorizzati per il trattamento della giardiasi nei cani e nei gatti.
Oltre al trattamento farmacologico, l’adozione di misure igieniche coerenti è essenziale per ottenere un successo terapeutico duraturo.

 

Fenbendazolo

Il dosaggio raccomandato per cani e gatti è di 50 mg/kg di peso corporeo una volta al giorno per 3-5 giorni. Tuttavia, nella pratica, una durata del trattamento di 3 giorni è spesso insufficiente. Pertanto, si raccomanda fin dall’inizio un trattamento di 5 giorni.

 

Metronidazolo

La dose raccomandata è di 25 mg/kg di peso corporeo due volte al giorno per 5-7 giorni. A causa della potenziale tossicità del metronidazolo, questa dose non deve essere superata, soprattutto nei gatti.

In pratica, si osservano frequentemente l’escrezione continua di cisti di Giardia e la persistenza dei sintomi clinici nonostante il trattamento con questi principi attivi. L’insuccesso del trattamento può essere dovuto a infezioni concomitanti, reinfezioni da un ambiente contaminato o eliminazione incompleta dei parassiti.

 

Monitoraggio della terapia

Secondo l’ESCCAP, il trattamento deve essere monitorato utilizzando uno dei metodi sopra descritti circa 5-7 giorni dopo il completamento del trattamento. Se i risultati rimangono positivi e i sintomi clinici persistono, il trattamento deve essere ripetuto.

Dott. Anton Heusinger

 

I nostri test per la Giardia

• Giardia EIA
• Giardia PCR
• Giardia IFAT
• Numerosi profili

Se vi è il sospetto clinico di infezione da FeLV ma il risultato del test di screening è negativo, si raccomandano ulteriori accertamenti, poiché è possibile un’infezione regressiva. In caso di infezione regressiva, non è rilevabile alcun antigene libero nel sangue e il test antigenico è quindi negativo nonostante la presenza di infezione (Fig. 2). In caso di infezione progressiva da FeLV, la prognosi è riservata. In caso di infezione progressiva, lo sviluppo di segni clinici e la morte sono attesi entro tre anni. Tuttavia, esistono anche casi di sopravvivenza a lungo termine.

La somministrazione di interferone sembra ridurre le infezioni secondarie e prolungare i tempi di sopravvivenza. I gatti con infezione regressiva rimangono solitamente asintomatici a lungo termine. Tuttavia, è possibile la riattivazione dell’infezione.
Il monitoraggio dei pazienti infetti da FeLV è di fondamentale importanza. Devono sottoporsi a visite cliniche regolari, inclusi esami del sangue per identificare eventuali problemi secondari (anemia, linfoma, altre infezioni). Si raccomanda la vaccinazione di routine contro le malat-tie infettive più comuni. I gatti infetti da FeLV dovrebbero essere tenuti in casa non solo per la loro protezione (infe-zioni secondarie), ma anche per impedire la trasmissione ad altri gatti.

 

Le domande più importanti riguardanti la FeLV

1.  Vi è il sospetto clinico di infezione da FeLV ma il test antigenico è negativo. Devo eseguire il test del provirus o l’antigene dovrebbe essere sempre circolante in un gatto malato?
   Di norma, l’antigene della FeLV sarà circolante anche se il gatto è clinicamente malato.
   Tuttavia, ci sono alcuni casi in cui l’infezione da FeLV è clinicamente grave ma l’antigene è negativo. Questi possono solitamente essere identificati tramite la rilevazione del provirus (PCR).
2. Con quale frequenza si riattiva un’infezione regressiva da FeLV? È ancora possibile che si ripresenti anni dopo?
   È possibile che si ripresentino focolai della malattia in una forma regressiva. Questo può verificarsi anche diversi anni dopo l’infezione. Purtroppo, non esistono dati esatti sulla frequenza con cui ciò accade. In uno studio, la riattivazione è stata osservata in 2 gatti su 37 con infezione regressiva.
3. Un gatto con infezione regressiva può trasmettere la malattia?
   I gatti con infezione regressiva non espellono il virus nella saliva o nelle feci e quindi non trasmettono la FeLV in modo naturale. Tuttavia, è opportuno notare che la trasmissione tramite trasfusione di sangue è possibile. I donatori di sangue dovrebbero quindi essere sottoposti non solo a screening con un test antigenico della FeLV, ma anche a test con PCR del provirus.
4. Quando un gatto con un test antigenico positivo per la FeLV dovrebbe essere nuovamente testato (per verificare se il gatto è diventato regressivo)?
   Una viremia iniziale può trasformarsi in un’infezione regressiva in cui è rilevabile solo il provirus. Il test antigenico diventa quindi negativo. Questo avviene solitamente entro 12 settimane dall’infezione, ma in rari casi può verificarsi anche più tardi (il tempo massimo documentato è di un anno). I gatti positivi al test Ag devono essere separati dai gatti sani e sottoposti a nuovi test a intervalli di 3-6 settimane. Se risultano negativi al test Ag, possono essere messi nuovamente insieme ad altri gatti.

FIV

Il virus dell’immunodeficienza felina (FIV) è un virus a RNA appartenente alla famiglia dei retrovirus, con la capacità di integrare il proprio genoma nel DNA delle cellule ospiti.
La trasmissione non è rapida come quella della FeLV. I gatti di solito si infettano tramite ferite da morso. È possibile l’infezione transplacentare dei gattini. La trasmissione durante l’accoppiamento non è stata descritta, sebbene il virus sia stato rilevato nello sperma di maschi infetti.
Sono possibili lesioni da morso durante l’accoppiamento. Una fase iniziale dell’infezione, che può essere accompagnata da lievi segni clinici come febbre o neutropenia, è seguita da una fase subclinica. La fase subclinica può durare tutta la vita. Il passaggio alla fase clinica dipende dall’isolato del virus, dall’immunità e dall’età del gatto al momento dell’infezione. I tipici segni clinici causati dalla FIV sono solitamente indotti da una disregolazione del sistema immunitario. Sono comuni gengivostomatite cronica, rinite cronica, linfoadenomegalia, glomerulonefrite e perdita di peso. Sono da aspettarsi infezioni secondarie virali, batteriche e protozoarie.
È stata descritta una maggiore incidenza di neoplasie (linfoma, carcinoma squamocellulare). Possono essere presenti anche alterazioni comportamentali e un ritmo del sonno alterato.
I gatti rimangono infetti da FIV per tutta la vita. Tuttavia, molti vivono con l’infezione fino all’età avanzata. Questo distingue l’infezione da FIV da quella da FeLV.

Un’accurata cura (inclusa una regolare igiene dentale e la protezione contro le infezioni secondarie) e un buon monitoraggio diagnostico clinico e di laboratorio sono essenziali per mantenere il paziente in buona salute.
L’emocromo, la chimica del sangue e le urine devono essere controllati ogni sei mesi. A seconda dei risultati, possono essere utili anche l’elettroforesi proteica e la determinazione della proteina di fase acuta amiloide A sierica (SAA). Un rapporto alterato dei cosiddetti linfociti T CD4/CD8 può indicare una disfunzione immunitaria esistente.
Per verificare l’infezione da FIV, si esegue solitamente un esame del sangue per la ricerca di anticorpi specifici per FIV (Fig. 3). Questo può essere effettuato utilizzando un test POC. Poiché l’infezione persiste per tutta la vita, la rilevazione degli anticorpi è adatta per la diagnosi. La sieroconversione avviene solitamente entro 2-4 settimane. In alcuni gatti infetti da FIV, tuttavia, la produzione di anticorpi può essere ritardata di settimane o mesi, mentre i gatti sono già in grado di trasmettere il patogeno.
Se il gatto vive in un’area con una bassa prevalenza di FIV, un test positivo deve essere confermato da un secondo test (non POC). Il cosiddetto metodo blot (Western blot, line blot) è adatto a questo scopo. A differenza dei test POC, questi metodi consentono la rilevazione di diversi anticorpi diretti contro antigeni specifici del FIV. Un blot test è considerato positivo per un’infezione da FIV solo se vengono rilevati anticorpi contro almeno due (preferibilmente tre) antigeni.

In caso di dubbio, si può anche prendere in considerazione la rilevazione del provirus mediante PCR, ma i risultati negativi non sono esclusivi per FIV (vedi sopra). I gattini di una madre infetta da FIV possono presentare anticorpi materni senza essere infettati a loro volta. In generale, gli anticorpi materni non persistono per più di 16 settimane, ma in alcuni casi possono essere rilevati fino a 6 mesi di età. Se un gattino di 16 settimane risulta positivo agli anticorpi del FIV, si raccomanda di ripetere il test dopo 2-3 mesi. Un risultato positivo al test anticorpale che persiste dopo 6 mesi di età è considerato prova di infezione. Risultati positivi al test possono verificarsi anche fino a 6 mesi dopo la vaccinazione. Tuttavia, i vaccini contro la FIV non sono attualmente autorizzati in Europa. Risultati negativi, nonostante l’infezione, possono verificarsi nei primi 60 giorni successivi all’infezione e nelle fasi finali.

 

Le domande più importanti sulla FeLV

1. Dopo quanto tempo dalla possibile trasmissione si può escludere con sicurezza un’infezione da FIV?
   Se esiste la possibilità che un gatto sia stato infettato (ad esempio perché è scappato), si raccomanda di metterlo in quarantena per tre mesi. Solo se il test anticorpale è negativo al termine di questo periodo si può presumere che non si sia verificata alcuna infezione.
2. Cosa si raccomanda in caso di un titolo anticorpale dubbio che persiste anche dopo due settimane?
   In questi casi, è consigliabile richiedere un test blot. Se questo è negativo, un’infezione è improbabile. Se anche il FIV blot fornisce risultati dubbi, è possibile eseguire una PCR per il provirus. Tuttavia, questa è significativa solo in caso di positività (= infezione da FIV presente). La PCR non può essere utilizzata per escludere l’infezione con certezza. La determinazione del quoziente CD4/CD8 può consentire un’ulteriore classificazione in determinate circostanze.
3. Perché una PCR negativa non esclude l’infezione con certezza?
   I test PCR attualmente disponibili rilevano il virus FIV di gruppo A (predominante in Europa) con elevata sensibilità e specificità. Tuttavia, la sensibilità per altri gruppi del virus è variabile. Inoltre, la variabilità del ceppo e il tasso di mutazione sono relativamente elevati, ovvero il virus può presentare differenze all’interno di un gruppo. Ciò significa che non tutte le infezioni possono essere rilevate dalla PCR. I risultati positivi sono quindi conclusivi.
   Tuttavia, un risultato PCR negativo non esclude con certezza un’infezione da FIV.

Dott.ssa Jennifer von Luckner, Theresa Marquar

 

 

I nostri servizi in breve
Antigeni FeLV	Screening Sospetto FeLV
Provirus FeLV-PCR   Anticorpi FIV (ELISA)	Conferma di un test antigenico FeLV positivo Rilevamento di un’infezione regressiva in un test antigenico negativoScreening per i donatori di sangue In casi dubbi il test deve essere ripetuto dopo 2-4 settimane. È necessario eseguire un FIV blot per confermare i risultati positivi.
FIV-PCR	Qualitativo: rilevamento del provirus Quantitativo: determinazione della carica provirale
FIV-Blot	Per verificare risultati incerti/borderline o confermare risultati positivi da test precedenti. Questa rilevazione di anticorpi viene eseguita utilizzando un line blot ed è altamente specifica grazie all’utilizzo di tre antigeni diversi.
Monitoraggio FIV	ALT, GLDH, ALP, BUN, creatinina CD4/CD8 (campione  < 48 ore) FIV PCR (quantitativa) + emocromo
Stato immunitario cellulare	Emocromo Determinazione di linfociti B (CD21+), linfociti T (CD3+, CD5+), linfociti T helper (CD4+) e linfociti T citotossici (CD8+)